应用蚕豆根尖微核技术检测不同品种茶叶遗传毒性.docVIP

精品论文 参考文献 应用蚕豆根尖微核技术检测不同品种茶叶遗传毒性 查艳景　刘　莉 （曲靖医学高等专科学校　云南　曲靖　６５５０００） 【中图分类号】Ｒ１１４【文献标识码】Ｂ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０６－０２０１－０１ 【摘要】：本文应用蚕豆根尖微核检测茶的遗传毒性方面作了一些研究。以不同品种（绿茶Ⅰ、绿茶Ⅱ、红茶、普洱生茶、普洱熟茶）不同泡数（洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤）的茶汤处理为实验组，蚕豆根尖细胞微核率的大小表示茶叶遗传毒性的大小。实验表明，茶汤具有一定的遗传毒性。同一品种不同泡数的茶汤处理后，微核率不同（洗茶汤＞一泡茶汤＞二泡茶汤）。绿茶Ⅰ的遗传毒性低于绿茶Ⅱ的遗传毒性，且差异性显著（Ｐ＝０．０３７７５，Ｐ＜０．０５），普洱生茶与普洱熟茶的遗传毒性相当，差异性不显著（Ｐ＝０．２２５４０３，Ｐ＞０．０５）。 【关键词】：微核试验；微核率；污染指数；农药残留；遗传毒性 一、　研究目的与意义 近代科学研究表明，茶叶中含有丰富的营养成份以及多种对人体健康有益的物质，这些营养成分是人体正常生长发育所必须的，并可以帮组人体预防和治疗某些疾病，如茶中含有大量的维生素Ｃ可降低胆固醇值，茶叶可预防糖尿病。市场上有许多茶产品，如佳洁士茶爽牙膏、茶多酚片、绿茶洁面乳等。 茶叶是日常生活的必需品，也是我国重要的传统出口商品，但随着人们生活水平的提高，对食品安全问题越来越重视，茶叶中农药残留问题已经成为国际贸易中的技术焦点，各国都制定了茶叶中的农药残留限量标准，检测项目不断增加，要求日趋严格。我国茶叶出口屡遭农药残留超标困扰，农药残留超标问题已经成为我国茶叶出口的一道关卡。 二、　实验材料与方法 ２．１　实验材料 实验材料：松滋青皮豆。 茶叶的品种：绿茶Ⅰ，绿茶Ⅱ，红茶，普洱生茶，普洱熟茶，这些茶叶都是２０１４年的春茶，在市场上随机购买。 ２．２　研究方法 基本按照《水和废水监测分析方法》进行，并做部分改进。 ２．３　实验步骤 ２．３．１　制备蚕豆根尖 （１）实验材料的培育 购松滋青皮豆种子，晒干贮藏于干燥器内或４℃冰箱内备用。 （２）实验材料的选择 将蚕豆从４℃的冰箱中取出，在室温（２０℃ －２５℃）下放置４８ｈ，选择颗粒饱满、大小均匀、胚芽无损坏、没有被虫食用的蚕豆干种子。 （３）浸种催芽 将选出的蚕豆放入底部垫洁净纱布的解剖盘中，在解剖盘中加入适量的蒸馏水，淹没蚕豆的３／４即可，置于室温下培养２４ｈ，此间换水３次。 种子充分吸胀萌发后，移至解剖盘中覆盖纱布以保持湿度，室温培养。待根长至１－２ｃｍ左右时，选择３２０个初生根尖生长良好、根长一致的蚕豆种子，随机分成１６组，每组２０个备用。 ２．３．２　处理蚕豆根尖 将上述备用蚕豆留下其中１组用蒸馏水培养作对照组，其余１５组分别用受试液培养，处理２４小时，每隔８ｈ换一次水。 ２．４．３　蚕豆根尖的恢复培养 将经各受试液处理过的根尖，用蒸馏水浸洗３次，每次２－３ｍｉｎ，将洗净的种子再放入底部垫有纱布培养皿中，盖上纱布在室温下保湿恢复培养２４ｈ。 ２．４．４　蚕豆根尖的固定与保存 将恢复培养后的蚕豆，剪下根尖１ｃｍ－１．５ｃｍ，用卡诺固定液固定２４ｈ。将固定后的蚕豆根尖用９０％酒精浸洗半小时，再用７０％的酒精浸洗半小时，然后放入７０％的酒精中置于４℃冰箱中保存，酒精的体积约为根尖的１５倍。 ２．４．５　解离蚕豆根尖 先用蒸馏水浸洗根尖１－２次，然后再用卡诺固定液固定一次，时间３－５分钟；将固定好的蚕豆根尖用蒸馏水浸洗２次，每次５ｍｉｎ，若根尖在冰箱中的储存时间短则不需要再次固定。用１ｍｏｌ／Ｌ盐酸于５０℃水浴箱中解离根尖５ｍｉｎ，再用蒸馏水浸洗２次，每次５ｍｉｎ。 ２．４．６　徒手制片 取出根尖置于擦净的载玻片上，用解剖针截取２ｃｍ左右根尖分生组织（解离后稍透明部位），用解剖针将其捣碎并均匀的涂开，滴上１－２滴卡宝品红染液，盖上盖玻片，染色５－１０ｍｉｎ后压片。 ２．４．７　蚕豆根尖的镜检及微核识别标准 制备好的装片置于显微镜上观察，每个待测液培养的根尖装片及对照组装片至少分别镜检１０个根尖，每个根尖装片在高倍镜下观察１０个视野，每个视野中大约１００个细胞，每个装片统计