陆地棉Coker 201和克劳茨基棉对称体细胞杂交的研究.pdfVIP

2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集 201和克劳茨基棉对称体细胞杂交的研究 陆地棉Coker 孙玉强张献龙金双侠梁绍光朱龙付聂以春郭小平 430070) (华中农业人学作物遗传改良冈家重点实验室．湖北武汉t 201(G．hirsutumL．)的细胞悬浮系来源的原生质休和野生棉克劳茨皋棉(G舶船c^fⅡn“mA)体 摘要以Coker 虽¨胞幼胚分离的原生质体在lU场下融合得到对称体细胞杂种。融合产物在改良的KM8P培养皋培养，添力¨2685¨M KT(kinetin)，持续分裂并 NAA(a-n卸h岫Iaceticacid)，0．269IsM2’4．D(2A-dichlorophenoxyacetic)和0465恤M 形成愈伤团。对W生植株进行形态、细胞学和分子生物学进行榆测。用流式细胞仪对{If生植株进行DNA相对龠量 8株进行RAPD箍定，至少16株是体细胞杂种， 测定表I射所榆测的W生植株DNA相对含量足双亲之和。随机选择1 JE中随机选择7株作染也体观察，它们染色体数日从72到81变化。1【If杂种的形态和双亲及从Coker201原生质休 W生的植株差异很人。这是首例报道通过原生质体融合得到棉花体细胞杂种。 关链词陆地棉； 克劳茨基棉； 原生质体融合： RAPD体细胞杂种 棉花是世界上最重要的经济作物之一，在经济、政治和社会生活中r’i有重要的位置。作为主要的纤维 生|王=过样中很容易遭受各种病虫害，常导致严重的经济损失，己成为影响棉花产昔和品质改良的重人障碍。 虽然传统的育种方法已经很人地改善了农艺性状，但是很难再培育山突破性的品种。今天棉花遗传改良面 临的I越难是缺乏抗虫抗病材料，然而野生棉具有优良的农艺性状：抗虫、抗病、耐盐、耐早等。野生棉和 栽培品种种间杂交仅局限丁通过“胚抢救”获得，而其F1代不育或低育性和该方法低效性限S07其在生 产上的应用。 棉花的组织培养技术发展很快，棉花的原生质体再生也取得了很大进展84】，然而棉花的体细胞杂交 至今没有成功的报道。通过原生质体融合得到体细胞杂种作为一种新的育种方法已经在油菜、玉米雨』，J、麦、 人白菜、水稻等”’”中取得成功。体细胞杂交能够把优良农艺性状从野生种转移到栽培r铺种，尤其是多基 冈或未知基因控制的性状，能够克服有性杂交不亲和性，导致新的基冈组合。 迄今，本研究是国内外首例通过原生质体融合得到棉花体细胞杂种。 1材料和方法 1．1双亲原生质体的来源 以陆地棉Coker201的悬浮系及野生棉克劳茨基棉体细胞幼胚为材料，分别在不加激素平¨添加O．045 O．46 pM2，4-D，2．5pMIBA，andlaMKT的液体和删体MS培养基继代，取继代10天的幼胚和继代3天的 悬浮细胞系分离制各原生质体。 平¨O．5％(w／v)、p纤维素酶’混合在黑暗条r}_F酶解16到20小时。原生质体经纯化．1i彳，／4tFDA检测其活性， 1．2原生质体融合和培养 将两种来源的原生质体按1：t的体积混合屙，用细胞融合仪SSH．2进行电场诱导融合。融合参数参照 郭文武等41，每次实验重复3次以上，以陆地棉Coker 20]细胞悬浮系分离的原生质体培养作为对比。融 合产物和对照都JLI=』KM8P培养基Ⅲ，添加2．685州NAA，0．269p．M 培养。形成小愈伤组织厉即可转移到I计阵培养基上进行分化o】。 !塑!笙全旦堡塑望堡堕翌堂查型!!垒丝苎篓 一 一 一 一 1．3再生植株的鉴定 (1)染色体分析：再生植株根尖州压片法【91制片。 D一48161) (2)染色体倍性分析：从柏雨生植株中每株取1～2cm2叶片州流式细胞仪Partec(GmbH