阳离子类脂的合成及应用研究.pdfVIP

factants[J)．1981。53(9)：1516～1519． [6]唐凯俞稼镛阴离子表面活性剂的测定方法一混合指示剂的程序加入法[J]．兰州大学学报(自然 科学版)2000，36(4)61-65 [7]华平张海军张跃军醇醚己基磺基琥珀酸混合双酯钠的合成与性能[J]．日用化学工业2003，33 (4)219--221 阳离子类脂的合成及应用研究 刘栋良 胡剑钧 李宗石 乔卫红程侣伯 (大连理工大学精细化工国家重点实验室 大连 116012) 摘要本论文设计合成了一系列氨基甲酸酯类基础阳离子类脂，以用于制备脂质体，并 与DNA形成脂质体／DNA复合物，用于体内及体外的基因转染试验。氨基甲酸酯连接键能 够在血液循环中保持稳定性，而进入细胞后，由于细胞内的PH值低于细胞外，它又能在酸 性条件下发生水解反应，从而使脂质体／DNA复合物解体，并将所携带的DNA释放到细胞 内。本论文先后探索了中间体长碳链烷基异氰酸酯与中间体胺基丙二醇的合成工艺路线。 在长碳链烷基异氰酸酯的合成中采用了碳酸双三氯甲基酯替代光气。在中间体胺基丙二醇 的合成中，本论文采用了一条改进的反应路线在常压下进行反应。在得到了高纯度的中间 体后，本论文对目标产物类脂的合成进行了探索，最后经分离提纯，得到了高纯度的目标产 物，其结构经核磁共振氢谱与电喷雾质谱检验得到确证。此外，本论文还对合成的类脂进行 了脂质体的制备与表征，经负染色透射电子显微镜显示，所合成的阳离子类脂能够形成小单 层与多层脂质体，其尺度为40—100nm。 关键词氨基甲酸酯；阳离子类脂：脂质体；基因载体；固体光气法；负染色透射电子显 微镜 1引言 阳离子类脂是一类特殊的阳离子表面活性剂，这种表面活性剂通常包含一个阳离子头部，两条疏水性 的饱和或不饱和的烷基链以及将这两部分连接起来的连接部。在水溶液中，这些阳离子类脂可自发形成 脂双层结构的脂质体…，这些脂质体可用于药物输送心】。1987年，Feigner等首先报道了双醚键连接的阳 导‘引，从那以后很多种阳离子类脂被相继合成出来用于介导基因转染实验H’5’6】。在基因治疗领域，人们 之所以对阳离子类脂有如此高的兴趣，是因为这些合成的阳离子类脂优异的非免疫原性及低细胞毒性¨’。 阳离子类脂可以和电负性的核酸物质相互作用并压缩核酸而自组装为类／]旨／DNA复合物b’。阳离子类脂 作为基因载运物质虽然具有无可比拟的优越性，由于人们对事物的认识程度总是不断深入的，过去提出的 一些阳离子类脂仍存在着一定的不足，使阳离子类脂作为基因运载工具的优越性没有完全发挥出来。比 如说过去合成出来的阳离子类脂的连接键多为醚键、酯键或酰胺键，这使得这些阳离子类脂或者过于稳定 不易生物降解从而造成细胞毒性，比如醚键；或者过于不稳定而在循环系统即易于分解而无法将所运载的 A．等发现氨基甲酸酯连接键对PH值很敏感，它们可以由于 基因运送到靶细胞，比如酯键b’8．9】。Jeremy PH值的降低而分解n们。众所周知，细胞内的PH值比细胞外低1—2，所以可以考虑利用这种连接键连接 的阳离子类脂分子在循环系统中保持稳定，而当进入细胞后由于PH值降低而使得这种连接键水解而释 放出载运物质。 A．等的启发，我们合成了系列用氨基甲酸酯键连接的阳离子类脂，并用它们分别制备了脂 受Jeremy 一129— 质体。为了合成该种阳离子类脂，首先需要合成两类中间体。一类中间体是用光气法合成长碳链异氰酸 酯，为了避免光气的巨大毒性，在合成此类中间体时采用固体光气来替代光气。另一个中间体是l一二甲 氨基一2，3一并二醇，在合成此中间体时，将Alquist，F．N的路线进行了改进，将合成过程由高压改为常 压u¨。最后，将合成的阳离子类脂制成脂质体，由透射电子显微镜观察显示，这些脂质体的直径为40— 100 nlTl．。这些用氨基甲酸酯键连接的阳离子类脂作为DNA载体的体外及体内的细胞转染实验正在进 行当中。 2实验部分 2．1试剂 十二胺、固体光气(碳酸双三氯甲基酯)、氯苯、吡啶、氢氧化钠、3一