鹅副黏病毒胶体金检测卡的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二班学术研讨会 菌有毒性，给构建稳定表达株带来一定的难度。以不溶解的包涵体表达重组抗菌肽是针对这 一问题的解决方案之一．第二，在规模化生产工艺方面至今还未走出一条成熟的路子。因而 对重组抗菌肽的表达调控和复性工艺研究十分重要． 3．2优化诱导工艺 根据重组菌的表达产量来判断。不论是诱导时间还是诱导浓度，在某一较大的区间内， 重组Gal3电sT可保持高水平表达。这提示，优化诱导方式，筛选好的生产工艺的确能节约 时间和材料成本，促进重组抗菌肽走向应用。此外，筛选不同的培养基和诱导剂，找到更廉 价的生产材料也是这一方面值得探索的题目，将在以后的研究中进行探索。 33影响重组G8B-GST复性的主要因素厦对策 提高包涵体的溶解率和重组蛋白的复性率对重组Gal3缶sT融合蛋白的终产量有是以不 溶解的包涵体形式存在，所以它的复性效率及成本才是制约开发应用的瓶颈。 包涵体溶解方法的选择非常重要，它直接影响到初始变性蛋白的浓度。在偏碱性环境中， 高浓度中等强度变性剂尿素和具有还原性的2．ME能使蛋白质肽链中非共价键及肽链间二 硫键完全打开。而低浓度的EDTA则可以螯台金属离子，从而防止蛋白降解并有利于蛋白 复性，这样也就提高了包涵体的有效溶解率。 复性溶液中变性剂浓度降低的幅度对复性效果影响最大．．若变化过大则会导致蛋白凝 聚。本试验采取了间歇加样两步稀释法，有效地减少了蛋白凝聚。而且其中的氧化还原环境 和oA喧能使蛋白折叠向正确的方向进行，从而也会减少因错误折叠造成的凝聚。此外，成 熟的Gal3包含三对二硫键，它们必须正确配对．Oal3才能具有抗菌活性。因而在复性时引 入氧化还原系统是不能缺少的。 稀释复性法不论从生产流程，还是成本控制等，从生产动物用药的角度。都具有较大的 吸引力。本研究在经过几步清洗后，包涵体所含的目的重组蛋白质的纯度接近90％，如果工 艺再进一步优化，其纯度不难达到动物药用要求。 在复性过程中和复性后蛋白质的稳定性问题始终是重要的，试验结果表明：在体系中添 加2．5％的甘油，可有效地提高Gal3如sT的稳定性。经检测复性蛋白在4℃存放180天后， 其抑菌活性没有发生改变。 本文用两步稀释法成功使大肠杆菌中表达的不溶性重组Gal3复性，再现了它的抑菌生 物学活性，为大规模表达生产Gal3建立了技术基础。但∥．蛋白活性的得率来看。稀释法的 复性效率还有一定的局限性，有待进一步提高。 参考文献略 鹅副黏病毒胶体金检测卡的研究+ 胡桂学l，王翌l。张喜悦2 (1．吉椿农业大学动物科学技术学院．古林长春130118；2．农业郝动物捡疫所，山东青岛266032) 擅要将本实验室．吐备的抗鹅副黏病毒(GPMv)Jo。4株单克隆抗体3A5标记肢体金颗粒，强纯的鸡IgG 潮卡检测鸡减蛋综台征病毒．传染性法氏囊炎病毒．待橐性支气管炎病毒、小鹅瘟病毒鸡胚或鸭胚尿囊液 和麻疹病毒，犬疸热病毒细胞培养物呈阴性，与鹅副黏病毒，孔雀潺新城疲毒椿，鸽源新城疫毒株、新城 瘦hs咖椿、鸡嚣新城疫病毒的尿囊洼出现阳性反应．敏惠性试验结果表明。谊检测卡可检出血凝效价为 24以上的鹅l《黏病毒阜囊液． 关键词鹅副缸病毒；单克隆抗体：免疫屡析检测卡；胶体仝 ·基金项目：古捧省科技厅发展计划项目2—2) 作者筒舟：胡桂学(1963年一’．男。搀士，教搜，主要从事每钕病毒学研究． 后补论文 性传染病。本病最早于1997年2月被扬州大学王永坤和华南农业大学辛朝安在国内首次发现 ”～。短短几年的时问，已在江苏，浙江、上海、安徽、山东、广东、江西、吉林、广西等 许多省市鹅群暴发流行【l。“l，造成了巨大的经济损失。传统的血清学、分子生物学等诊断 方法，常需要特殊仪器、试剂及专门的技术人员，不易在基层广泛使用。因此。建立简便快 速的鹅副黏病毒病诊断方法十分必要。20世纪90年代，在单克隆抗体、胶体金免疫层析和新 材科技术的基础上．发展起来一项新型体外诊断技术——挟速诊断试纸条p“j．由于其不需 任何仪器设备和试剂，树分钟就可用肉眼观察结果，特别适合于广大基层单位使用。本实验 将胶体金免疫层析技术引入鹅副黏病毒的检测，在制备GPMv单克隆抗体的基础上，研制了 。 检测GPMV的胶体金免疫层析检测卡。