鹅圆环病毒浙江永康株全基因组的克隆及遗传分析.pdfVIP

优秀论文 鹅圆环病毒浙江永康株全基因组的克隆及遗传分析 余旭平 郑新添何世成 朱军莉 沈琴芳 张秀亮 (浙江大学动物科学学院，浙江杭州310029) [摘 要]为研究水禽流感大规模爆发的机理，我们开展了水禽流感病例中并发病原的研究。根据已发表的鹅圆环病毒 根据测定的序列进一步设计反向扩增引物，经扩增、测序、拼接后获得GoCV全基因组序列。基因组序列分析表明，浙江永康株 GoCV 毒可以感染淋巴细胞等增殖快的细胞，引起免疫抑制，从而造成其他病原的并发和继发感染，推测它协助了水禽流感的爆发。 [关键词]鹅；圆环病毒；全基因组序列 观察，在爆发病例中有很大一部分是水禽流感。按照传统观点，水禽常带毒但很少大面积爆发，由于禽流感病毒主 要在水禽的肠道中复制，因此常由于污染水源而引起鸡和火鸡的爆发o]。为了解水禽大规模爆发禽流感的机理， 我们开展了禽流感爆发病例中的并发病原的检测与研究，特别是一些可以引起免疫抑制的病原。 只有鸡贫血病毒(cAV)一个成员，基因只由基因组正股链编码；而后者具有双向转录方式，该属目前包括猪圆环 doves、 特别是禽类的圆环病毒研究受到了一定的限制o]。 不一，但它们往往侵染淋巴细胞等增殖速度快的细胞，引起淋巴细胞数量的减少，免疫力下降，导致动物对多种条 件性病原二次感染的易感性增加。 发育不良、体重下降、羽毛粗乱等临床症状；病理剖检和组织学检查发现最主要的病理变化在淋巴网状组织，表现 为法氏囊、脾脏和胸腺的淋巴细胞减少和组织细胞病变，其中法氏囊病变最明显，在一些病例中出现整个囊结构 的破坏。其它的病理学变化包括轻度的气囊浑浊，肺、肝、心肌散在的炎性细胞浸润等。D．Soike等人在一些病例 的法氏囊髓质、皮质和囊上皮细胞内观察到包涵体，它们呈球状或粗糙颗粒，嗜碱性，与周边呈嗜伊红的胞质背景 间界限清晰，～些包涵体还较其边上的正常细胞体积更大“]。 2001年D．Todd等人根据BFDV和PCV的V1 ORF保守序列设计兼并引物，克隆测定了鹅圆环病毒的全 全序列。现将结果与分析报告如下： 1材料与方法 1．1病料 浙江永康某鹅养殖场病死鹅。 生垦亘塑量匿堂垒宣煎堂坌叁墨士兰壅堂查堑过金迨塞塞 1．2病料核酸的提取 1．3GoCV特异片段的PCR扩增与检测 根据已发表的GoCV基因组序列V1 dn一对引物。 C PCR反应程序如下：94 5分钟，然后进入94℃40秒，57℃60秒，72C60秒的循环，共30次，最后72c延 伸5分钟，4C结束反应。 1．4GoCV基因组全序列扩增 在已测定的552bp序列的基础上，设计反向引物ip--up、ip—dn。 40秒，58C 反向PCR反应程序为：94℃5分钟，然后进入94C 60秒，72c 延伸5分钟，4℃结束反应。 1．5特异性片段的回收与克隆测序 生物技术有限公司测序。 1．6序列的BI。AST比较与拼接 的seqman文件，进化树的构建使用的是其MegAlign文件。 1．7用于同源性比较和进化树构建的其它圆环病毒序列及GeneBank登录号 PiCV(AJ298229)；PCV—l(U49186)；PCV一2(AF027217)。 2结果 2．1GoCV序列的检测 认该片段为GoCV特异片段。 2．2GoCV—yk01序列的反向扩增、克隆和测定及全基因组序列的拼接 (GenBank登录号为AY633653)。 2．3GoCV—yk01基因组结构分析 1725)，C2(nt 426—127)(表1)，据推测口3VI ORF编码外壳蛋白，V2和C2 ORF编码复制相关蛋白Rep，C1 ORF和C1 ORF功能未知。与