鹅源副粘病毒F基因在杆状病毒表达系统中的表达.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 表达新城疫病毒F和HN基因和传染性喉气管炎病毒gB基因的重组厶 鸡痘病毒的构建 孙惠玲，王云峰，童光志· (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001) 随着集约化养殖的发展，禽类呼吸道疾病的危害变得愈加严重，新城疫、禽流感、传染性支气管炎和 传染性喉气管炎等对养禽业造成了巨大损失．严重制约养禽业的健康发展。尽管传统方法制备的疫苗在疾 病的控制上曾经发挥重要的作用，但随着疾病清除计划呼声的日渐高涨，人们对免疫原性好且能够进行鉴 别诊断的新型疫苗需求越来越迫切。禽痘病毒载体疫苗具有上述优点并取得了可喜的进展，但随着禽痘病 毒载体疫苗研究的深入，活载体的应用也就渐渐暴露出了一些缺陷：国内外市场上的痘病毒载体疫苗多数 是针对单一病原的主要保护性基因，由于免疫后机体产生针对痘病毒的抗体，机体接种携带其它抗原基因 的重组痘病毒将会受到影响，这使痘病毒载体在现地的应用受到限制。而构建多价重组痘病毒，即达到一 针多防的目的又可减少接种次数，可能是将来痘病毒载体的发展趋势。 及Pll控制下的大肠杆菌报告基因LacZ。用禽痘病毒载体上的引物和外源基因的特异引物进行PCR证明 基因工程疫苗奠定了基础。 鹅源副粘病毒F基因在杆状病毒表达系统中的表达 左玉柱丁壮 (吉抹大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室) 摘要将含有鹅源副枯病毒(NA-l株)F基因的重组质粒PMDF用限制性核酸内切酶XbaI I和Sph 双酶切，经琼脂糖凝胶电泳，回收纯化，得到F基囚。用Xba I质粒裂酶切，回收， I和SphI将pFastBae I质粒与F基因用T4DNA连接酶进行粘性末端连接，得到阳性重组质粒PFF。PFF转 将酶切的pFastBae 化大肠杆菌DHl0Bae后，F基因在助手质粒(helper 昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化。表达的F蛋白约占细胞总蛋白的10％。 关键词鹅源副枯病毒F基因重组质粒基因表达Western．blot 副粘病毒F蛋白除了参与病毒的穿透、细胞融合和溶血作用，与病毒的致病性有关外，还具有良好的 727 家禽传染Ii； 免疫原性，是病毒主要的保护性抗原。抗新城疫病毒F蛋白的单抗，在体内外均能中和新城疫病毒的毒力， 用F基因构建的重组病毒免疫动物后可抵抗NDV强毒的攻击Ⅲ。因此，研究新城疫基因工程疫苗时F基 因是首先目的基因【21。目前，用于表达F蛋白的病毒载体主要有鸡痘病毒、疱疹病毒、逆转录病毒和杆状 到100％保护。近些年来，用杆状病毒载体表达F蛋白的研究较多，这些研究证明多数重组体免疫动物后 能产生较高水平的特异性抗体，对动物致死性感染具有完全保护作用川。为了探讨该病的有效的防制办法． 本研究采取新型杆状病毒表达系统表达了鹅源副粘病毒NA．1株F蛋白基因。 杆状病毒表达载体只所以受到人们的广泛重视．是由于其具有许多优点：(1)杆状病毒有两个非必需 区，用外源基因取代后并不影响病毒的复制和装配。(2)可容纳的外源基因量很大，可插入大片段多种基 to 表达系统，称为BacBac系统，其构建和筛选方法简单，阳性重组率高，是目前最好的杆状病毒表达系 to 统。本研究利用BaeBac系统，构建了表达鹅源副粘病毒NA-l株F蛋白的重组杆状病毒，并在昆虫细 胞中成功地表达了F蛋白。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1质粒转座载体pFastBae 毒NA-l株F基因)本文作者构建。 肠杆菌DH5a由本研究室保存，Sf-9昆虫细胞由医科院军事兽医研究所涂长春研究员惠赠。 1．1．3试剂 限