应用生物化学 第一章 生物化学物质的制备.ppt

2、吸附法：将干葡聚糖凝胶加入提取液中，由于凝胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右。 　　　　　　　　　 3、超过滤法：把提取液装入过滤装置，在空气或氮气的压力下，使小分子物质通过半透膜，大分子物质留在膜内。 4、透析浓缩法 5、减压蒸馏浓缩法：将提取液装入减压蒸馏装置中，在减压真空状态下进行蒸馏。 6、冰冻干燥法 浓缩实例 （一）、硫酸氨盐析法 1.原理： 根据蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增高而上升（盐溶），但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降，直至蛋白质析出，盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出。 蛋白质分子表面的疏水性区域都聚集许多水分子，当盐类加入时这些水分子被抽出，以便与盐离子进行水合，暴露出来的疏水性区域相互结合形成沉淀。 2、影响蛋白质盐析的因素 （１）蛋白质浓度对盐析的影响：蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉现象，分离效果不好；蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率也低。一般为2.5%-3.0%的蛋白质浓度较适中。 （２）离子强度和离子类型对盐析的影响：离子强度越大，蛋白质的溶解度越低，越容易产生盐析现象；离子半径小而价数高的离子在盐析方面影响较强，离子半径大而价数低的离子对盐析影响弱。 （３）ＰＨ对盐析的影响：蛋白质所带净电荷越多，溶解度越大；在净电荷为零时，溶解度最低。一般将ＰＨ值调到蛋白质等电点附近，这样有利于盐析。 （二）、有机溶剂沉淀法 1、原理： 有机溶剂对许多溶于水的小分子生化物质以及核酸、多糖、蛋白质等生物大分子都能发生沉淀作用。 对于具有表面水层的生物大分子来说，有机溶剂可破坏溶质分子表面的水膜，使这些大分子脱水而相互聚集析出。不同溶质要求不同浓度的有机溶剂，因此可用有机溶剂进行分步沉淀。 有机溶剂 2、优点：有机溶剂沉淀法分辨能力比盐析法高，沉淀不用脱盐，过滤比较容易。 3、缺点：对某些具有生物活性的大分子，容易引起变性失活，操作常在低温下进行；分离效果差，共沉作用大；离子强度及离子种类对其也有影响。 （三）、透析浓缩法 1、原理： 天然或人工半透膜只允许小分子通过而阻碍大分子通过。当膜的两侧存在小分子浓度梯度差时，小分子就从高浓度一侧向低浓度一侧扩散，直至达到平衡，如果能不断去除扩散出来的小分子，从而达到分离纯化的目的。 2、影响透析的因素 1、半透膜的通透性：半透膜的通透性取决于膜孔径的大小，在能阻碍大分子扩散的前提下，孔径越大，透析速度越快。 2、透析外液的更换 3、温度：温度越高，透析速度越快。 4、压力：用跨膜的压力梯度可加速大分子的分离速度。 （四）、等电点沉淀法 原理： 利用两性电解质在等电点处溶解度最小的性质。不同的两性电解质其等电点不同，其在电中性时溶解度不相同。因而等电点沉淀法可用于某些两性电解质的分离如氨基酸、蛋白质、核苷酸等。 为了增加沉淀效果，往往在等电点时再加上其他沉淀因素，所以等电点沉淀法一般不单独使用，常和盐析法、有机溶剂沉淀法一起使用，以提高其沉淀能力。 * 胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。作用机理属于受体酪氨酸激酶机制。 1、penalty kick的缩写：PK其实就是指足球中的点球大战，这一幕往往也是足球运动中最惊心动魄、决定胜负的时刻。(注：penalty: n.处罚,罚款; kick: v.踢n.踢)??? 2、player killing的缩写：是一种打斗方式，引申为“单挑”，来源于网络游戏中玩家之间的对打，是一个电脑游戏中的专有名词。(也就是两个玩家决斗，单挑决出谁是胜者。是一种非常刺激的玩法，如果你不买某个人的帐，最出气的办法就是象剑客一样向他发起挑战，并把他摞倒在台上。)(注：player:n.做游戏的人,比赛者; killing: n.v.杀害) * 胸腺位于胸骨后面，紧靠心脏，呈灰赤色，扁平椭圆形，分左、右两叶，由淋巴组织构成。青春期前发充良好，青春期后逐渐退化，为脂肪组织所代替。 　　胸腺是造血器官，能产生淋巴细胞，并运送到淋巴结和脾脏等处。这种淋巴细胞对机体的细胞免疫具有重要作用。 　　生长激素和甲状腺素能刺激胸腺生长，而性激素则促使胸腺退化。 　　胸腺肽是胸腺产生的一种蛋白质和多肽激素，能刺激T淋巴细胞的成熟，平衡和调节免疫功能，是一种与机体的细胞免疫有密切关系的激素。人到成年后，胸腺逐渐萎缩，胸腺素分泌急剧减少或缺失，此时为提高免疫功能减弱的机体，补充胸腺素是所必须的。 * 用大肠杆菌表达，由于其不能将所表达的蛋白质分泌