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精品论文 参考文献 中药材附子遗传多样性研究 摘要：本文采用随机扩增多态DNA（RAPD）分子标记技术从5条引物中筛选出3条对4种附子药源植物（乌头），共32个个体进行遗传多样性分析，结果表明4个品种中存在较丰富的遗传多样性，且野生种的遗传多样性高于家培品种，说明野生附子药源植物的遗传资源丰富，应该加以保护。 关键词：附子药源植物；DNA检测；遗传多样性 作者简介：尹彩云，任教于陕西省岚皋中学。 中药材附子为毛茛科多年生草本植物乌头的侧根（子根），主产于四川、陕西等地。附子味辛、甘，性大热，有毒，具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒邪等功效。 随机引物扩增多态性 DNA可直接反映生物体内 DNA 分子水平上的多态性，已广泛应用于植物种类的亲缘关系分析、种质与品种鉴定、遗传连锁图谱的构建、基因定位等研究。 一、材料和方法 1.试验材料 采用简单随机抽样法获得家培、野生圆头、野生长头、鸭嘴4种附子药源植物的叶片，用清水洗净晾干后立即放在密闭塑料袋中-70℃保存。 2.引物序列 3. DNA提取 采用改进的SDS（十二烷基磺酸钠）法提取附子基因组DNA。 4.PCR扩增程序 94℃预变性2min后进入以下循环，90℃变性30s，36℃退火1min，72℃延伸2min，46个循环后，再在72℃下延伸10min。4℃保存。 5.电泳 　　PCR产物用2.5%琼脂糖凝胶电泳，核酸染料染色。电极缓冲液为0.5XTBE缓冲液在6.6V/cm电场下电泳1h, 在BIO－RAD凝胶成像仪上照相。 6.统计方法（带的记录） 电泳图谱的每条带（DNA片段），均为一个分子标记，代表一个引物结合位点。根据各分子标记的迁移率有带记作1、无带记作0，统计得到所有位点的二元数据。 二、试验结果 1.DNA的检测 将基因组DNA用1%琼脂糖凝胶电泳检测，从图2.1可见DNA呈现一清晰的条带，表明DNA没有发生降解且纯度很好。 　　2.RAPD扩增产物的电泳图谱 对所用材料用5个引物进行RAPD扩增，筛选出3个扩增条带多于4条且清晰的引物进行研究。图2..2、图2. 3、图2. 4分别为引物3967、3972、3979扩增产物的电泳图谱。 　　 三、结果与分析 　　1. 多态位点百分率根据扩增结果计算出各品种在3个引物上的多态位点百分率，见下表。 由表可知4个品种的多态位点百分率,说明野生种的遗传多样性高于家培种，为保证附子药源植物的质量和开发利用应当对野生种进行重点保护，防止盲目的杂交改良。 2.遗传相似度分析分别在品种内与品种间两个水平上对4个品种进行遗传多样性分析，见下表。 由表可见,通过种间的遗传相似度分析看出野生种三个品种间的遗传相似度比野生与家培品种的要高，说明这3个引物可以用于附子遗传多样性的研究。 3.遗传距离分析 由表可知4个品种间存在较大的遗传差异，家培与野生的差异最大，说明人工选择和环境的改变导致了附子药源植物基因组的改变和进一步分化，形成了不同的品种，其药效是否受到影响和改变还需进一步的研究。用POPGENE32对4个品种进行聚类分析，说明在本实验选择的位点上野生圆头和老鸦嘴的遗传距离比最近，亲缘关系也就最近，家培附子与另外三个品种的遗传距离都较远。 四、结论 1.本研究从5个随机引物中筛选出3条对4种附子药源植物（乌头）进行了遗传多样性分析。 2.家培品种多态位点百分率为18.02%、野生长头21.68%、野生圆头24.32%、老鸦嘴33.86%，表明附子药源植物的遗传资源丰富，应该加以保护。 3. 在本试验所选择的3个引物上野生圆头和老鸦嘴的亲缘关系最近，家培品种与另外三个品种的遗传距离较远，说明家培品种存在较大的变异与分化。 参考文献： [1]任冰如，於虹，贺善安.仓术DNA分离及RAPD遗传多样性分析[J].植物资源与环境1997（4） [2]汪小全，邹喻苹，张大明等.银杉遗传多样性的RAPD分析[J].中国科学（C辑），1996（5）. [3]马小军，汪小全，肖培根等.野生人参RAPD指纹的研究[J].药学学报，1999（4）. 作者单位：陕西省