动物细胞融合与单克隆抗体1913.ppt

让学生思考如下问题： 1、从个体发育的角度看，选取什么样的组织作为培养对象？ 2、怎样将动物活体组织分散成单个细胞？可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？蛋白酶处理组织会不会破坏细胞的结构？ 3、培养基是用液体的还是固体的？培养基中应加入哪些营养物质？ 4、培养动物细胞时放在什么样的温度下，对培养液的PH值有什么要求？培养瓶中的气体由要求吗？ 5、怎样防止培养液当中混入细胞菌或病毒？ 6、动物细胞能无限增殖下去吗？——一般10代以内可以保持正常核型不断增殖，从10代到50代细胞增殖会逐渐减慢直至完全停止。少数细胞由于传代过程中细胞核型发生改变突破了接触抑制可无限增殖下去成为不死性的细胞。 1、卵母细胞从哪来？——屠宰场废弃的卵巢中采集到卵母细胞，体外培养到减数二次分裂中期。 2、如何去除细胞核？——用微型吸管吸去卵母细胞核和第一极体，也可用射线或某些化学药物等处理细胞破坏受体细胞核。 3、对供体牛有何要求？——优良品种 4、克隆动物的过程中实际有哪些技术支持？——动物细胞培养、核移植、胚胎移植 5、克隆牛的性别和主要性状与哪头牛相同？为什么？——性别和主要性状都与供体牛相同，因为哺乳动物的性别是由性染色体组成决定，克隆牛的染色体全都来自供体牛，因此相同；主要性状由细胞核中遗传物质决定的，因此也与供体牛相同。 6、克隆牛的性状与供体牛完全相同吗？为什么？——不完全相同，一方面去核卵细胞质中带有少量的DNA，其控制的性状与供卵的细胞相同；另一方面，生物的表现型是由基因型与环境因素共同作用的结果，环境不同，表现型也可能不同。 7、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？——因为动物细胞培养在10代以内一般能保持正常核型，而传代到10代以上，则有可能出现变异的核型，遗传物质发生改变，不利于全能型的表现。 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶处理分散成单个细胞 幼龄动物的器官组织；动物胚胎 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 不死性细胞 课 前 复 习 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 体细胞核移植过程（体细胞克隆动物） 存在的问题（1）成功率非常低 （2）克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问题（3）对克隆动物食品的安全性问题也存在争议。 专题2 细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 主备人：姚雪丰 议课时间：第15周 上课时间：第17周 环节Ⅰ：学习目标 1.掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。 2.简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。 3.了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说出其应用实例。 阅读教材52∽54页，回答下列问题： 环节Ⅱ：问题导学 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 2.常规血清抗体与单克隆抗体有何区别？ 3.单克隆抗体怎么制备？ 4.单克隆抗体主要有哪几方面的用途？ 一、动物细胞融合 9:45 环节Ⅲ：点拨精讲 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 1、概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、结果 形成单核的杂交细胞 3、原理 细胞膜的流动性 4、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 一、动物细胞融合 动物细胞融合过程示意图 不同DNA的两个细胞 灭活的病毒 有丝分裂 两个完整的杂交细胞 技巧归纳 灭活的病毒能作为诱导剂,不灭活的病毒不能作为诱导剂 1.灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。 2.不灭活的病毒会感染细胞,而不能诱导细胞融合。 5、过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 1个完整的杂交细胞AB （膜融合、质融合） （核融合） 细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核 6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用： 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。 最有价值的应用 制备单克隆抗体 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 原生质体融合 植物组织培养 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 常用方法 8.植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁