第6章分子荧光与磷光.ppt

1. 分子荧光、磷光分析法的基本原理 2.荧光分析仪器 3. 分子荧光定量分析 4.荧光的影响因素，分子荧光的分析应用 通常具有不饱和基团的基态分子光照后，一个价电子跃迁，跃迁到激发态 （3）.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 2.荧光（磷光）分析仪器 仪器光路图 仪器框图 2.1.1.光源 激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽 荧光计中，常使用卤钨灯作光源 荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯 荧光计用滤光片作单色器，荧光计只能用于定量分析，不能获得光谱。 大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱。 第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex ，用此激发光? ex激发液池内的荧光物质。（VB2 ? ex为471nm） 第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长? em。 在选定的? em 下测定荧光强度，定量分析。 （VB2 ? em为525nm） 盛放测定溶液. 通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边 2.2.激发光谱和荧光光谱获得 异常现象 2.3 磷光分析仪器 定量分析依据 If = Kc Ip = Kc 1) 标准曲线法——最常用的定量分析方法 将已知量的标准物质与试样在相同条件下处理，配制一系列标准液，测定它们的相对发光强度。 以相对荧光强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标 浓度 c1 c2 c3 c4 c5 cx 荧光强度 If1 If2 If3 If4 If5 Ifx 2) 比较法——较简单 如果试样数量不多，可用比较法进行测量 配一标准溶液浓度为cs， cs与未知液浓度cx相近，并在相同条件下测定它们的荧光强度 未知液 If x = K cx 标准液 If s = K cs 3) 多组分混合物的荧光分析 (1) 如果两组分的荧光峰相互不干扰,可直接测定 可分别在各自的?荧波长处测定,求出它们的含量 (2) 如果两组分的荧光峰相互干扰,但激发光谱有显著区别,在某一激发光下一个组分产生荧光峰,另一组分不产生荧光; 可选用不同的激发光进行测定 (3) 如果两组分的荧光光谱和激发光谱相互干扰 利用荧光强度的加和性（If=If1+If2+If3+…），在适宜的荧光波长处测定，用联立方程来求解 例：硫胺荧 CT ? ex =385nm ? em=435nm 吡啶硫胺荧CP ? ex =410nm ? em=480nm 在385nm下激发，在435和480nm下分别测荧光强度 大多数荧光物质首先吸收紫外可见光,产生? ? ?*，n ? ?*跃迁激发，经过非辐射跃迁，再发生?* ? ?, ?* ? n跃迁产生荧光。 ? ? ?*与n ? ?*跃迁相比，摩尔吸收系数大102~103倍，寿命短。 ? ? ?*跃迁常产生较强的荧光， n ? ?*跃迁产生的荧光弱，但可产生系间窜跃，产生更强的磷光。 具有共轭体系的芳环或杂环化合物， ?电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强 4.3. 刚性平面结构—较稳定的平面结构 具有强荧光的分子多数有刚性平面结构 例 1，2 - 二苯乙烯 4.4. 取代基效应 ——取代基对荧光物质的荧光特征和强度也有很大影响。分成三类： （1）增强荧光的取代基 —— 有 -OH、-OR、 -NH2、-NHR、-NR2等给电子基团。 由于基团的 n 电子（孤对电子）的电子云与苯环上的 ? 轨道平行，共享了共轭 ? 电子，扩大了共轭体系，使荧光波长长移，荧光强度增强。 （2）减弱荧光的取代基 —— -COOH 、 -NO2 、-COOR 、-NO、-SH 吸电子基团, 使荧光波长短移，荧光强度减弱 芳环上被F、Cl、Br、I 取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为重原子效应。 （3）