2015版《中国药典》微生物检查法控制菌检查法修订解析.ppt

2015年版《中国药典》微生物检查法控制菌检查法修订解析 一、主要变化 1.收载方式 一、主要变化 2.检查项目 一、主要变化 3、对替代方法的认可：本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。——新增内容 4、结果判断方式：在各控制菌项下，生化实验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验。”改为较少的生化实验或“采用其它适宜的方法进一步鉴定。”较大变动 二、通用要求 控制菌检查法适用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。 当本法用于检查非无菌制剂及原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。 供试液制备及实验环境要求同《非无菌产品微生物检查：微生物计数法》。 如果供试品具有抑菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物的无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用的中和剂或灭活剂的相容性。 三、培养基适用性 1、对照培养基 《中国药典》2010年版借鉴欧美药典，引入了培养基适用性检查以保障微生物限度检查结果的准确性和可靠性。但是，在药典修订过程中，对于欧美药典中的“之前验证过的培养基”的采纳与否，存在很大争议，主要集中在两点： 一、我国药品微生物实验室小而分散，数以千计的企业和基层药检所难以有效地进行参比培养基的验证、评价工作； 二、在监督检查中，难以有效评估企业微生物实验室对参比培养基的验证情况。 经过第九届药典委员会微生物专业委员会的反复讨论，提出以统一的、经过充分评价和验证过的对照培养基替代需要由每个实验室分散评价的“之前验证过的培养基”。 三、培养基适用性 1、对照培养基 （1）培养基适用性检查试验可用于确定实验室所使用培养基（包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方使用不同批次的原材料自行配制培养基等）制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。 上述影响培养基质量的关键点应通过培养基适用性检查试验确定，如果其中有任何一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。但是，影响培养基质量的关键控制点的变化应掌握在微生物实验室质量控制的一般原则内，否则，无法通过培养基适用性检查确定。 三、培养基适用性 1、对照培养基 （2）当检查结果出现异常或实验室质量控制需要，也可通过培养基适用性检查提供一定依据。在保证配制和灭菌过程无误的条件下，对照培养基可以不经适用性实验检查直接用于样品检查。 （3）不同处方培养基的替代使用不能通过培养基适用性试验简单确定。不能使用经过对照培养基进行适用性试验检查合格的其他培养基作为实验室自用的“对照培养基”。 （4）如果没有特殊规定，培养基配置采用蒸馏水或纯化水均可，但应进行检测控制，如蒸馏水pH应为5～7。 三、培养基适用性 1、对照培养基 （5）尽量临用现配，培养基灭菌后，尽快取出，切忌在高压锅内过夜存留，固体培养基灭菌或融化后，融化状态放置不得超过8h；一般预制培养基可置洁净环境2～25℃保存，但不应超过21d；固体琼脂培养基熔化再使用应不超过1次。 （6）干粉培养基或培养基原料变质再用；预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、长菌、严重脱水等变化应不再使用。 三、培养基适用性 2、工作菌种的制备 3、菌悬液的获得方式 4、适用性检查 （1）控制菌检查用培养基数量减少7个； （2）在増菌过程，使用无选择性増菌培养基培养，是因为药品中的污染菌受到加温、冷冻、酸碱、高渗等加工过程的影响，会受到不同程度的损伤。如果将供试品直接使用选择性増菌培养基培养，可以使受伤的细菌得到修复，提高检出率。 三、培养基适用性 4、适用性检查 三、培养基适用性 4、适用性检查 （1）测试能力：促生长能力（+）；抑制能力（-）； 指示能力（“指示”） 1）琼脂： 方法：涂布，至少2皿。 ①比较菌落特征 ②是否生长 2）液体： 方法：直接接种 ①培养基是否浑浊 三、培养基适用性 4、适用性检查 （2）要求： 1）菌株：根据表格要求接种 2）接种量：根据测试指标而定