TCRVβ基因谱系分析在AIDS疾病T细胞克隆性研究中的应用研究.pdf

动物实验 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 转化，提高肌体的细胞免疫功能；消除机体内超氧自由基；保护细胞膜稳定性及通透性；蛹 虫草可明显提高Nl(细胞的活性，Nl【细胞是细胞免疫中的非特异性部份，可直接作为杀伤细 胞发挥作用，是细胞免疫最重要组成之一，Nl(细胞具有良好的抗肿瘤作用伊“。研究提示， 蛹虫草通过影响机体免疫系统的多个环节，增强机体的免疫功能。虫草多肽为蛹虫草经过酶 解工艺直接制得的蛹虫草水解物，给予小鼠连续灌胃30d，能提高小鼠的抗体生成细胞数和 血清溶血素水平，促进小鼠的单核一巨噬细胞碳廓清功能及腹腔巨噬细胞的吞噬能力。促进 小鼠的迟发型变态反应，显著提高小鼠的Nl【细胞活性。由此可见，虫草多肽具有增强小鼠 免疫力功能作用。 参考文献： [1]贡成良，吴友良，朱军贞，等．关于作为冬虫夏草代用品的家蚕蛹虫草研究[J]．药用植物研究，1997。 6(1)：46～53． [2]彭国平，李红阳，袁永泰． 冬虫夏草与人工蛹虫草的成份比较[J]．南京中医药大学学报，1996，12 (5)：26～27． [3]中华人民共和国卫生部，保健食品检验与评价技术规范[s]，2003年版：22～34． [4]崔新颖，崔新羽，张成义．新型蚕蛹虫草对对小鼠免疫增强作用的实验研究[J]．北华大学学报(自然科 学版)，2004，5(5)：405～407． [5]孙艳，官杰，王琪．人工蛹虫草子实体对荷肝癌小鼠的抑制作用及提高Nl【JL_2活性的实验研究[J]．中国 药业，2002，iI(7)：39～40． TCRV 13基因谱系分析在AIDS疾病T细胞克隆性研究中的应用 赵维波，黄韧，张钰 (广东省实验动物监测所，广州510260) 【摘要】运用RT-PCR对反转录的目的eDNA进行扩增，而后用此产物为模板进行二次PCR扩增得到荧 光产物；荧光产物通过序列分析仪的扫描进行TCRVB基因谱系分析，并通过测定特定CDR3长度及序列出现的 频率来反映T细胞克隆扩增的程度和功能状态，使我们更加了解AIDS的免疫机制、药物或疫苗的治疗效果等。 【关键词】T细胞受体B基因；T细胞克隆性；获得性免疫缺陷综合征； T细胞免疫在AIDS的疾病进程中起着重要的作用，抗原特异性的T细胞免疫基本上可以从 3个范畴加以界定：1、T细胞的特异性和有效功能性；2、特异性T细胞的数量，可以 通过CD4／CD8T细胞中特异T细胞的数目界定；3、特异性T细胞的质量，可以由T细胞受体‘(TCR) 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验 决定u。，监测特异性T细胞的质量可以更好地了解疾病的免疫状况。TCR由a(胚系基因中AV、 以及连接时插入的核苷酸序列，分别组成了特异的TCRQ和is的CDR3基因谱型的多样性，而这 B卜VB 研究中对TCR§基因的研究较为深入，现已知B区有24个谱系，即V24。一种CDR3序 列代表一个T细胞克隆，通过测定特定CDR3长度及序列出现的频率可以反映T细胞克隆扩增的 程度和功能状态，使我们更加了解AIDS的免疫机制、药物或疫苗的治疗效果等埋。。 1 T细胞克隆性分析方法 现在对TCRVB谱系的分析主要采用以下方法，即锚式PCR(anchorPCR)、细胞流式分析(flow PCR cytometry)、异源双链核酸PCR分析(heteroduplexanalysiS)和基因扫描分析 研究中应用的最为广泛，其主要原理是根据VB谱系的特点设计24个上游引物及1个下游引物， 经过特异性扩增产生的阳性产物，再经标记的下游引物进行半巢式PCR扩增得到荧光产物；荧 光产物通过序列分析仪的扫描确定不同DNA产物大小(峰的位置)，通过峰的大小及分布提示产 物来自单克隆、寡克隆和多克隆的T细胞，进而了解到各TCRVB亚家族T细胞的分布情况以及 在哪一TCRVB亚家族中出现克隆性增长的T细胞。另外，当出现单克隆或寡克隆产物还可以进 一步进行序列分析，了解其CDR3的核苷酸序列H1。 但是在标记下游引物进行半巢式PCR时候，不可避免的碰到在进行Genescan时候的工作量