免疫学检验-单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术.pptVIP

* 单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术 本节课主要内容 一、抗体分子的结构 二、细胞工程抗体和基因工程抗体 三、治疗性单抗研制进展 Fc Fab 一 抗体分子结构 V:variable; C:constant; H:heaven; L:light CDR: Complement Determinant Region CDR Epitope 二、细胞工程抗体和基因工程抗体 第一代：多克隆抗血清 第二代：细胞工程抗体 第三代：基因工程抗体 抗体技术的发展经历了三个阶段 ㈠ 多克隆抗血清 对健康人用疫苗进行主动免疫，免疫前（a）和免疫后10天 （b）分别采血并对血清蛋白进行凝胶电泳分析。免疫前血清中的g 球蛋白条带较宽，免疫之后则相对集中。Bruton 氏病患者血清蛋白中的 ?球蛋白条带缺失（c）。 a1 a2 b g 白蛋白 球蛋白 （c） （a） （b） 多价抗原 单克隆 （致敏的B细胞） 多克隆抗体 ㈡单克隆抗体 基本原理：细胞工程抗体制备 杂交瘤细胞 单克隆抗体 骨髓瘤细胞 致敏的B淋巴细胞 杂交瘤 HAT: 次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T) HGPRT：次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶 蛇毒单抗的制备 Cell fusion 抗血清 单克隆抗体 基因工程抗体 破伤风抗血清 抗肿瘤 (鼠 , 人-鼠 ) 抗肿瘤 , 自身免疫病 不同类型的抗体对人们生活的影响 ㈢基因工程抗体 ?通过基因重组改良抗体性能 Susumu Tonegama,1987, structure of Ig gene 小分子抗体 人源化抗体 抗体融合蛋白 Ig基因及其重排 V V V V V V V V J J J J J K 着丝粒 V V V V V V VPREB1 V V J1 L1 J2 L2 J3 L3 J4 L4 J5 L5 J6 L6 J7 L7 IGLL1 IGLL2 IGLL3 免 疫 球 蛋 白 基 因 结 构 V V D D D D V V D D D D J J J J M D G3 G1 EP1 A1 GP G2 G4 E1 A2 95个 IGHV 23个 IGHD 9个 IGHD 9个 IGHJ 11个 IGHC 900 kb 240Kb 22Kb 35Kb 300Kb IGH （位于染色体 14q32） IGK （位于染色体 2p12-p11） 1.85M b 0.85M b 多于90个 IGKV 5个 IGKJ IGKC 11个 IGKV orphons IGL （位于染色体 22q11） 60个 IGLV ? 800K b 14K b 60K b 670Kb 30Kb 150Kb 7个 IGLJ 与 7个 IGLC 交替排列 3个 IGLL 基因座 ⒈ 小分子抗体 1 2 3 大肠杆菌表达；容易穿透；不含Fc,副作用小；半衰期短，有利于毒素的中和和清除 Diabody structure CTL CD3 TUMOR CELL -S-S- VH CH1 VL -S-S- CH1 抗原A 抗原B 双特异性抗体 ⒉ 抗体融合蛋白 ?抗原结合部位Fab与生物活性蛋白结合 免疫导向：与毒素、细胞因子结合 嵌合受体：与细胞膜结合 免疫桥连 ?含Fc段的抗体融合蛋白 延长血清中半寿期 生物学效应功能：ADCC、CDC 免疫黏附素：与CD4结合 ⒊ 鼠单抗人源化 ●恒定区人源化——人-鼠嵌合抗体 ●可变区人源化——人改型抗体 ●用抗体库技术进行人源化 鼠单抗人源化 Pr 鼠VH 人 CH Pr 鼠VL 人 CL 免疫球蛋白 基因载体的构建 H链嵌合载体 L 链嵌合载体 共转染细胞 启动子 人-