新型生物反应器内神经干细胞的大规模培养研讨.pdfVIP

J056 新型生物反应器内神经干细胞的大规模培养研究1 薛长颖 刘天庆 葛丹 李香琴 孙相彧 （大连理工大学环境与生命学院，辽宁大连 116023 ） 摘 要 神经干细胞是一种多潜能干细胞，它是中枢神经系统所有细胞的原祖细胞。它的发现为 神经系统的退行性疾病--如帕金森疾病，亨廷顿疾病，多发性硬化症等-- 的治愈带来了希望的曙 光。同时，它也为药物测试提供了潜在的资源。因而，对于这些细胞的体外扩增方法的研究成为 一个亟待解决的问题。本文的目的旨在研究生物反应器内大规模扩增神经干细胞的方法。实验采 用新型旋转壁式生物反应器，为细胞的生长提供与体内环境比较相似的三维生长环境。旋转壁式 生物反应器内，神经干细胞能以聚集形式悬浮生长。在这个微环境内，细胞的生长状况以及反应 器内的环境条件，包括细胞的新陈代谢，生长分化和接种条件，剪切力控制，养分的传递等关键 的环境条件，都作以详细的研究。另外，新型生物反应器内培养的神经细胞经鉴定具有良好的干 细胞特性。研究表明旋转壁式生物反应器内大规模培养神经干细胞的可行性与有效性。 关键词 旋转壁式生物反应器 神经干细胞 大规模培养 引 言 1992 年，Reynolds 和 Weiss[1]首次从成年鼠纹状体中分离出能在体外持续增殖并具有 向神经细胞及星型胶质细胞分化的多潜能的细胞群--神经干细胞。神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs ），根据Mckay[2] ，1997 年在Science 上发表的文章，是指具有自我更新能力并 且能够分化产生三种中枢神经组织细胞－神经元，星型胶质细胞，少突胶质细胞的一种干细 胞。近年来人们对它进行了很多研究，发现神经干细胞在脑中能根据其周围微环境的诱导而 分化成相应的形态和功能与附近宿主细胞非常类似的细胞。另外，由于它的血脑屏障结构， 使得它在细胞移植后几乎没有排异反应。因此，它在神经系统疾病治疗上显示了潜在的研究 价值和应用价值。然而，当前神经干细胞的应用大多是来自胚胎，来源十分有限。因此，体 外大规模获得神经干细胞成为一项十分有意义的研究。 神经干细胞在体外以单层贴壁和神经球悬浮两种方式生长。神经球即是细胞在悬浮状态 下不断分裂，然后集合成小的球状细胞集合体。目前大多数研究采用神经球悬浮培养方式。 本实验室培养方式优化的研究结果也表明神经干细胞悬浮生长的细胞活性比单层生长的细 胞活性好。至今，有报道对神经干细胞进行体外大规模扩增研究的只有Kallos[3] 的工作组。 他们也采用悬浮培养的方式，并且选用传统的 spinner stirrer 反应器进行研究。尽管取得了 一定的成功，但是这种反应器在培养的过程中目的细胞将不可避免地受到很大的外部机械装 置剪切力的影响, 同时其在传质过程和模拟人体微环境等方面也不尽如人意。 ∗ 国家自然科学基金两个基地国际合作项目(2002008)和辽宁省科学技术基金资助项目 。 作者简介: 薛长颖，女，黑龙江省大庆市人，主要从事神经干细胞大规模扩增研究。电话：0411 Email: chyxue2008@ 通讯作者：刘天庆，大连理工大学干细胞与组织工程研究室，辽宁省大连市，116024. 电话：0411 Email: liutq@. 旋转壁式生物反应器（Rotating Wall Vessel, RWV ）是1992 年美国NASA 为在地面上模 拟微重力条件下细胞的生长而开发的一种新型细胞及组织培养装置[4，5] 。本实验室也利用 这种旋转流动环境产生动态层流原理，研制出一种新型的旋转壁式生物反应器。在此种反应 器内，由于没有推进器，气体也是通过渗透膜进入培养室，因而培养体系对细胞的剪切损害 较小。另外，它为细胞生长及细胞之间的联系提供了很好的三维生长环境，这种环境更加接 近于体内生长的自然环境[6]。本研究利用这种新型的旋转壁式生物反应器，研究神经干细 胞在其内的生长情况以及反应器的物理操作参数对其的影响，为进一步的体外大规模获得神 经干细胞奠定坚实的基础。 1 实验材料和方法 1.1 材料 1.1.1 细胞来源 昆明种孕小鼠，胚龄 13～15 天(大连医科大学实验动物中心提供) ，胎鼠前脑部位神经 干细胞。 1.1.2 细胞培养基 本实验室优化的神经干细胞培养基