HIF-1α基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制.pdfVIP

第5期 潘克俭等． HIF-la基因RNA干扰耐肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制 RIPA细胞裂解液收获蛋且。将抽提蛋白用有变化(见图2)，显示HIF一1a蛋白质表达受低氧诱 Bradford法定量，70弘g／泳道进行SDs—PAGE；电泳 结束后，以100V，90min将蛋白转移至PVDF膜I降解HIF一1nmRNA，有效抑制其蛋白合成。载体瞬 封闭液(含O．5％脱脂奶粉)封闭2h，加入一抗(1。 时转染的抑制率60蹦“=5，Po．05)。 400，V／V)4℃过夜，二抗(1：1500，V／V)室温下 杂交45min，洗膜后用EcL试剂盒进行发光反应， 压片、显影、定影，观察蛋白印迹，并进行图象分析。 2．7统计处理 实验数据使用sPssll．5统计分析软件分析检 验。 3结果 田2HIF一扭smNA寰达藏律对细胞HIF—Ia蛋白袅达的影响 HIF—lasiRNA vcetordecren9egthe or F强2 expre姻lve expr鹤sion 3．1 HlF-la RNA干扰对HepG2细胞HIF一1amRNA表p曲懈n 达的抑制 La呻1IHIF—ldpfoteinexpre8sion帅dernormoxia，Lane2tHlF—l口 prote|n 3I HIF-k e‘pressionundcrhypoxia，Laneprotein RNAi H1F一14 of 在常氧条件下培养的HepG2细胞就有HIF一1aexp㈣…fgroup，Lane4t proteinexpre8sion mRNA的表达，缺氧24h后，其表达没有明显的升 scr8mbledgfoup 高；转染HIF一1asiRNA表达载体后，HepG2细胞 3．3 抑制HIF一1a表达对vEGFmRNA表达的影 HIF—k mRNA的表达明显被抑制，而无义siRNA 响 载体组HIF一1amRNA表达没有变化(见图l、图 在常氧条件下培养的H印G2细胞中，VEGF 4)，Po．01，显示HIF一1a 8iRNA表达载体转录的 mRNA的表达较低。缺氧24小时后，其表达有明显 siRNA能有效的降解HIF一1nmRNA，抑制其表达。 并缺氧培养24h，当HIF一1Ⅻ·RNA的表达被抑制 后，vEGFmRNA的表达也明显下降}而无义 siRNA载体组VEGFmRNA表达没有变化(见图 1n mRNA的表达被有效的下调。 围l HIF—laglRNA裹选载体对细胞HIF·laRNA裹选的抑捌 IF-1asmNA themRN^“ FI啬l expressI”Y¨tordo*nreguIntes HIF-1d La耻MI 1adder，Lane1j HIF．1口mRNA 100bp expression