《细胞工程》实验三 贴壁细胞株的传代培养.pptVIP

* 贴壁细胞株的传代培养 贴壁细胞 细胞来源：人乳腺癌细胞：MCF-7 肿瘤相关成纤维细胞：CAF 1.培养条件 培养基：1640培养基（或DMEM）（含10%FBS） PH： 7.2-7.4（可稍偏酸） 温度： 37℃ 气体组成： 5%CO2+95%空气 孵育箱 0.25%胰酶 配制方法： 0.25g胰酶+100mlPBS+0.02gEDTA 4℃过夜溶解 超净台滤器除菌 0.25%胰酶（ 4℃保存，-20 ℃长期保存） 2. 传 代 实验步骤： 弃去培养基，PBS洗2-3次 加胰酶（每瓶0.5ml左右，覆盖细胞即可） 消化适当时间，加完全培养基中和（与胰酶比例2:1） 吸取细胞悬液至离心管中 离心（1200转左右，3分钟） 弃去上清液，加入新的培养基 成细胞悬液后，转移到培养瓶中 3. 细胞冻存与复苏 收集细胞时，除需用胰酶消化外，其它同悬浮细胞