微生物工程与发酵.ppt

微生物制药与发酵 发酵工程 张金玲 1043111073 1.发酵的定义和种类 1.1 发酵： 通过微生物的培养而获得产物的过程。常常用产物说明，冠以某某发酵，如青霉素发酵，维生素发酵等。发酵工程按需氧分为好氧发酵和厌氧发酵。 1.2发酵的种类： 1.2.1微生物菌体发酵 微生物菌体发酵是以获得微生物菌体为目的，如：面包的酵母发酵、单细胞蛋白发酵（利用各种碳源）、真菌类（各种蘑菇、冬虫夏草）、生物防治剂（苏云金杆菌，伴孢晶体可以毒杀鳞翅目、双翅目害虫）。 1.2.2 微生物酶发酵 微生物酶发酵是以获得酶为目的的发酵，如青霉素酰化酶，用于半合成青霉素时，制备中间体6－氨基青霉烷酸。 1.2.3 微生物代谢产物发酵 ①初级代谢产物：氨基酸，核苷酸，维生素，有机酸。 ②次级代谢产物：最主要的是抗生素。 1.2.4微生物转化发酵 利用微生物的一种或多种酶把一种化合物转变为结构相关的更有价值的产物的生化反应为转化发酵。 细菌还可以产生氨基酸和维生素，如黄色短杆菌（Brevibacterium flarum）产生谷氨酸，大小菌生产维生素C。 2.2放线菌： 放线菌主要产生各类抗生素，以链霉菌属最多，诺卡菌属较少，还有小单孢菌属。生产的抗生素主要有氨基糖苷类（链霉素、新霉素、卡那霉素等）、四环类（四环素、金霉素、土霉素等）、 放线菌素类（放线菌素D）大环内酯类（红霉素、螺旋霉素、柱晶白霉素）和多烯大环内酯类（制霉菌素、抗滴虫霉素等）。酸性、碱性和中性，但以碱性为多。 2.3真菌： 真菌的曲菌属产生桔霉素，青霉素菌属产生青霉素和灰黄霉素等，头孢菌属产生头孢霉素等。脂环芳香类或简单的氧杂环类，多为酸性化合物。 3.发酵制药的基本过程 发酵制药就是利用制药微生物，通过发酵培养，在一定条件下，生长繁殖，同时在代谢过程中产生药物，然后，从发酵液中提取分离、纯化精制，获得药品。 其三个主要工段为菌株选育（mutation and selection breeding）、发酵(fermentation)和分离纯化(isolation and purification) 3.1菌株选育: 菌种选育使青霉素的产量由最初20单位提高到80000单位以上。优良菌种应该高产、性能稳定、容易培养。 3.2发酵: 发酵阶段包括孢子制备、种子制备、发酵培养，是生物加工工程过程。 3.2.1孢子制备:保存的菌株，在固体培养基上，复苏，生长产生孢子。 3.2.2种子制备：将制备的孢子接到摇瓶或小发酵罐内，培养，使孢子发芽繁殖。对于大型发酵，普遍采用2次扩大培养制备种子，最后接入发酵罐。 3.2.3 发酵：将种子以一定的比例接入发酵罐，培养，是生产药物的关键阶段和工序。需要通气，搅拌，维持适宜的温度和罐压。发酵一定周期。期间，取样分析，无菌检查，产量测定。加入消泡剂、酸碱控制pH，补充碳源、氮源和前体，促进产量。 3.3分离纯化: 分离纯化阶段包括发发酵液的预处理与过滤、提取与精制、成品检验和成品包装，是化学分离工程过程。 3.3.1发酵液的预处理与过滤：使发酵液中蛋白质和杂质沉淀，增加过滤流速，使菌丝体从发酵液中分离出来。如制霉菌素、灰黄霉素、曲古霉素、球红霉素药物存在于菌丝中，要从菌体中提取。如果存在于滤液中，澄清滤液，进一步提取。 3.3.2提取与精制：吸附、沉淀、溶媒萃取、离子交换等从滤液中把药物提取出来。精制是浓缩或粗制品进一步提纯并制成产品。可重复或交叉使用四种基本方法。 3.3.3成品检验：包括性状及鉴别试验、安全试验、降压试验、热源试验、无菌试验、酸碱度试验、效价测定、水分测定等。 3.3.4 成品包装：合格成品进行包装，为原料药。制剂由制剂车间或厂再分装。 4.发酵过程的主要控制参数与检测 4.1物理因素： 主要包括温度、罐压、搅拌速度（r/min）、空气流量（v/(v?min)）、料液流量（L/min）等。 4.1.1 温度：是指发酵中的所维持温度，是重要的参数，由温度计直接读出。温度的高低直接关系到细胞的酶活性和反应速度、培养基中的溶解氧和传递速度、菌体的生长速度和产物合成速度等。 4.1.1 罐压：罐体内维持正常的压力。罐压的测定是原位传感，压力计上直接读出。发酵罐维持正压防止杂菌侵入，罐压影响CO2和O2的溶解度，压力大小对细胞本身有影响。 4.1.2 搅拌速度（r/min）：每分钟搅拌器的转动次数。影响氧等气体在发酵液中的传递速度和发酵液的均匀程度。搅拌功率（kw）影响液相体积氧传递系数 4.1.3 空气流量（v/(v?min)）：每分钟单位体积发酵液内通入的空气体积，影响供氧及其他传递。由流量计直接读出。 4.1.4 料液流量（L/min）：控