猪链球菌真核样丝氨酸苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建.pdfVIP

中国人兽共患病学报 1162 Chinese ofZoonoses 2013，29(12) Journal issn．1002—2694．2013．12．007 DOI：10．3969／cjz．j 猪链球菌真核样丝氨酸胁氨酸激酶stk 基因敲除株的构建 杜骁杰1～，王 玲1，郑 峰2，李 敏2，王 晶2，胡 丹2，李先富2，王长军2，潘秀珍1‘2 摘 要：目的 构建猪链球菌(Streptococcus like kinase，eSTK)stk基因敲除突变株。方法构建中间为壮观霉素抗性基因(Spc’)，两侧为stk编码基因上下游 Ser／Thr 同源序列的基因敲除质粒，通过同源重组筛选s趺编码基因敲除突变株。结果 组合PCR分析和基因测序结果均显示stk编 失。对筛选的突变株进行连续传代培养，证实△sz§能够保持稳定的壮观霉素抗性表型。结论s缦基因敲除突变株的成功构 建，为阐明该基因在猪链球菌致病过程中的作用奠定基础。 关键词：猪链球菌；真核样丝氨酸／苏氨酸激酶；基因敲除；突交株 中图分类号：R378．1 文献标识码：A 文章编号：1002—2694(2013)12—1162—06 ofthe kinasestk Ser／Thr gene Developmenteukaryotic—like knock—outmutantofstre suis ptococcus DU Min2，WANG Fen92，LI Jin92， Xiao—jiel”，WANGLin91”，ZHENG Xiu—zhen2 HUDan2，LIXian—fu2。WANGun2，PAN Chang—j Normal 210023，China； (1．CollegeofLifeSciences，NanjingUniversity，Nanjing 2．Institute Medical 210002，China) ofMilitary Sciences，NanjingCommand，Nanjing a knock—outmutantofa onthe of recombination，weconstructed eukaryotic— ABSTRACT：Based gene principlehomologous was 2virulentstrain05ZYH33．Recombinantknock—outvector