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稳定表达猪CYP3 A29基因的PAM细胞系构建及鉴定.pdf
江苏农业学报(JiangsuJ.of Agr.Sci. ),2014,30(3):554 ~559
554 http:/ /
郅西柱,方晓敏,赵 芳,等. 稳定表达猪CYP3A29基因的PAM细胞系构建及鉴定[J].江苏农业学报,2014,30(3):554-559.
doi:10.3969/ j.issn.1000-4440.2014.03.016
稳定表达猪CYP3A29 基因的PAM 细胞系构建及鉴定
1,2 2 2 1,2 2 2 2 1,2
郅西柱 , 方晓敏 , 赵 芳 , 周艳红 , 涂 枫 , 李碧侠 , 王学敏 , 任守文
( 1.南京农业大学动物科技学院,江苏 南京 210095;2.江苏省农业科学院畜牧所,江苏 南京 210014)
摘要: 为获得稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系,利用RT-PCR方法获取猪 CYP3A29基因序列后
与克隆载体PMD18-T相连,得到PMD18-T-CYP3A29重组质粒并测序验证,利用Xho I和Not I双酶切重组质粒及
pcDNA3.1(+)/ zeo,回收后连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/ zeo-CYP3A29,双酶切及测序验证其正确
性,并以脂质体2000将其转染至猪肺泡巨噬细胞系3D4/ 21,经Zeocin抗性筛选,借助RT-PCR及Wesrern-blot鉴定
该基因的表达情况。 结果表明,成功获得表达CYP3A29 的细胞株,且连续培养 10代后,RT-PCR及Wesrern-blot仍
能检测到该基因表达。 说明,稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系构建成功,该细胞系的成功构建为进一
步研究分析猪CYP3A29基因的功能提供了可能。
关键词: 猪; CYP3A29; 肺泡巨噬细胞; 稳定表达细胞系
中图分类号: S831.2 文献标识码: A 文章编号: 1000-4440(2014)03-0554-06
Establishment and identification of porcine alveolar macrophage cell line
stably expressing CYP3A29 gene
1,2 2 2 1,2 2 2
ZHI Xi-zhu , FANG Xiao-min , ZHAO Fang , ZHOU Yan-hong , TU Feng , LI Bi-xia ,
2 1,2
WANG Xue-min , REN Shou-wen
(1.College of AnimalScienceand Technology,NanjingAgricultural University,Nanjing210095,China;2.Instituteof AnimalScience,JiangsuAcademy of
Agricultural Sciences,Nanjing 210014,China)
Abstract: The cDNA of CYP3A29 gene was amplified by RT-PCR and was then subcloned into plasmid PMD18-T
vector to obtain a recombinant plasmid PMD18-T-CYP3A29,which was verified by DNA sequencing. CYP3A29 genefrag-
ments and pcDNA3.1(+)/
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