Caco-2细胞与肠道菌共培养初建体外肠道共生模型.pdfVIP

第 33卷 第 1期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1．33 No．1 2012年 1月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Jan． 2012 Caco．2细胞与肠道菌共培养初建体外肠道共生模型 陈晓清 ，焦 红 ，程树军 ，易敏英 ，刘静宇 ，许龙岩 3 刘 超 (1．中山大学公共卫生学院，广东广州 510080；2．广东出入境检验检疫局 ，广东 广州 510623； 3．广东检验检疫技术中心食品实验室 ．广东 广州 510623) 摘 要：【目的】构建体外模拟肠道共生系统，用于评价食源性抗菌药及其耐药菌作用于肠道菌群时对人体健康造成的 危害风险。【方法】21d体外培养构建Caco．2细胞三维肠上皮，分成无菌对照组、混合的正常菌群组、沙门菌组、混合菌群一沙 门菌组4组 ，制备混悬液，各组分别单独和混合培养4h，荧光定量PCR法测试共培养前后各菌 16SrDNA菌量变化，电阻仪 测试跨膜上皮电阻(TEER)数量；免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO一1变化，评价三维肠上皮屏障功能的改变。【结果】在体 外共培养模型内，4种肠道菌混合培养4h后同单独培养组间比较 ，细菌量增长无统计学差异 (P0．05))：需氧菌的增长速 度明显高于厌氧菌(P0．01)，厌氧菌 ：需氧菌浓度 比接近 100：1，厌氧菌仍为优势菌。TEER和ZO一1免疫荧光染色结果均提 示混合肠道菌群对 Caco一2细胞三维肠上皮无明显破坏，侵人性沙门氏菌可显著降低 TEER值 ，并观察到模型的ZO一1结构受 到破坏。这种破坏作用在混合肠道菌群加沙门菌群组较轻。【结论】Caco一2细胞三维肠上皮同乳双歧杆菌、植物乳酸杆菌、大 肠杆菌和粪肠球菌组成的混合菌群体外共培养能建立稳定的体外肠上皮模型，并具有生物学活性 ；正常肠道菌群对侵人性 沙门菌有拈抗作用。该模型可进一步完善作为食源性抗菌药、耐药菌与肠道系统相互作用研究模型的基础。 关键词：Caco一2细胞；体外肠道模型 ：食源性耐药菌：16SrDNA 中图分类号：Q26 文献标志码：A 文章编号 ：1672—3554(2012)01—0121—06 Co-cultureofCaco-2IntestinalCellandIntestinalFlorastoBuildanInVitroIntestinalM odel CHENXiao—qing，JIAOHong ，CHENGShu—jun，YIMin—ying，LIUJing—yu。，XULong-yan，LIUChao (1．SchoolofPublicHealthofSunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China；2．GuangdongEntry-ExitInspectionand QuarantineBureau，Guangzhou510623，China；3．FoodLabofGuangdongEntry—ExitInspectionandQuarantineBureauTechnology Center，Guangzhou510623，China) Abstract： O【bjective】Tobuildaninvitrointestinalmodelwhichwillbeusedtoassesstheharmriskcausedbyfoodborne antimicrobialandtheresistancebacteriatohumanhealth．M【ethod】TheCaco一2intestinalepithelialmodelsafter21daysculturewas built，4groupsweredivided：negativecontrolgroup，mixflorasgroup，Salmonellagroup，mixfloro~Salmonellagroup，thetime forco—culturewas4h． The16SrDNA rfagmentofeach florabeforeand aft