肉牛附红细胞体PCR检测方法的建立与初步应用研究.pdfVIP

江西农业大学学报 2013，35(1)：0161—0164 http：／／xuehao．jxau．edu．cn ActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensis E—mail：ndxb7775@ sina．con 肉牛附红细胞体 PCR检测方法 的建立与初步应用 许兰娇 ，陶清松 ，黄志海 ，瞿明仁 ，何后军 ，万 根 (1．江西农业大学 动物科技学院，江西 南昌 330045；2．江西省宜春市畜牧科学研究所，江西 宜春 336000) 摘要：为建立一个能快速准确的检测出肉牛附红细胞体的分子生物学诊断方法 ，及时监控好人畜共患病。试验 根据 Genbank中发表的肉牛附红细胞体 16SrRNA序列设计一对特异性引物，通过PCR方法，对肉牛附红细胞 体基因组DNA进行扩增。结果表明：扩增出了一段412bp的DNA片段，与Genbank中发表的肉牛附红细胞体 序列同源性为98％。将建立的PCR方法对大肠杆菌、弓形体、胸膜肺炎放线杆菌的DNA进行检测为阴性 ，检 测肉牛附红细胞体DNA的最低浓度为 1．23ng／ 。该方法快速、准确、特异性好、灵敏度高，为肉牛附红细胞 体病的临床诊断提供了新的方法。 关键词：肉牛；附红细胞体；PCR；检测方法 中图分类号：$823．94 文献标志码：A 文章编号：1000—2286(2013)01—0161—04 Establishmen andApplication ofPCR M ethod forDetection ofCattleEperythrozoonosis XULan-jiao，TAOQing—song，HUANGZhi—hai ， QUMing—ren，HEHou-jun，WANGen (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，Chi— na；2．YichunCityAnimalHusbandryScienceInstituteofJiangxiProvince，336000，China) Abstract：Inordertoestablishadiagnosticmethodofmolecularbiologythatcanrapidlyandaccurately detectcattleEperythrozoonto surveyandpreventand controlzoonoses，apairofspecificprimerswerede— signedaccordingtothepublishedsequencedata16sribosomalRNA geneofbeefcattleEperythrozoonfrom GenbanktoamplifygenomicDNA ofcattleEperythrozoon．Theresultshowedthatthetargetedgenefragment was412bpinlengthand98％ identicaltothepublisheddata．ThegenomicDNA ofEscherichiacoli，Toxo— plasm andActinobacilluspleuropneumoniaewasamplifiedbythemethod，theresultwasnegative．Thesensitiv- ityoftheassaywasI．23ng／p．LofDNA．Itsuggestedthatthemethodisarapid，accurate，specificandsen— sitivediagnosticmethodforcattleEperythrozoon． Keywords：cattle；eperythrozoon；polymerasechainreaction；detectionmethod 肉牛附红细胞体病是由温氏附红细胞体(Eperythrozoonwenyonii)寄生于肉牛红细胞表面、血浆及骨 髓等部位引起的一种人