茄子雄性不育基因工程及可调控雄性不育体系的研讨.pdfVIP

摘 要 利用基因工程来创造植物雄性不育系能够克服传统雄性不育选育方法的 困难和缺陷，因此受到人们的关注。茄子是重要的蔬菜品种，本文作者试图 利用这一技术来获得茄子雄性不育株系用于杂交制种。为此，本文作者首先 较为系统地研究了茄子几个主要栽培品种的子叶和下胚轴的组织培养和植 株再生，在此基础上建立了可以用于遗传转化研究的茄子外植体高效再生体 系。随后利用来源于烟草的绒毡层特异启动子 TA29与解淀粉芽饱杆菌的 RNA酶基因barnase及其抑制蛋白基因barstar，构建了植物表达载体 pBI-TA-BN-Bar和pBI-TA-BS-Bar。采用农杆菌介导法转化茄子下胚轴，将 雄性不育基因转入茄子品种七叶茄中，获得了在卡那霉素筛选培养基上生根 的再生植株5株。PCR鉴定表明，外源的雄性不育基因barnase己经整合到 转基因植株中。 在杂交制种过程中，如果能将四环素诱导体系与花药特异表达启动子结 合起来，使得雄性不育基因在四环素诱导的情况下在花药特异表达，则可以 实现两系法育种的设想。为此，本实验室构建了一个由四环素诱导操纵子和 TA29启动子相结合的可调控组织特异性基因表达体系。该体系能调控基因 在四环素诱导情况下在花药绒毡层表达GUS报告基因。在完成了载体转化 烟草的实验后，本文作者对该体系稳定表达的情况进行了研究，证实该体系 在稳定表达水平上具有良好的四环素诱导活性和花药绒毡层表达特异性。在 此基础上，又构建了一对用于可调控雄性不育的工程载体。其一为组成型表 达的TetR载体，该基因产物在非诱导情况下能与四环素操纵序列结合抑制 转录。另一个是将可调控GUS表达体系中的GUS基因置换成雄性不育基因 barnase。这对载体的结合使用可以使受体植株在四环素诱导情况下表达 barnase而造成雄性不育。 关键词:雄性不育 基因工程 茄子 四环素诱导 绒毡层特异表达 Abstract Itisattractingofthemalesterilegeneticengineeringinplantbecause itcanovercomedifficultiesoftraditionalbreedingway.Forhybridcross wewanttocreatethemalesterileeggplantusingthismolecular technology.Ahigh-efficientregenerationsystemwasestablishedafter studyingcotyledonandhypocotyltissuecultureoffourmainvarietiesof eggplant.Then,combiningthetapetum-specificTA29promoterwith RNAasegenebarnaseoritsrepressorgenebarstar,malesterilitygene vectorpBI-TA-BN-Baranditsfertility-restorergenevectorpBl一丁A-BS-Bar wereconstructed.ThevectorpBl一丁A-BN-Barwastransformed into eggplanthypocotylusingAgrobacterium tumefaciensmethod.Five transformantswereobtainedintheKanamycinselectivemedium.PCR identifyingshowedthattheforeigngenebarnasehadbeenintroduced intoeggplant. Ifchemicalinducible system andtapetum-specificpromoterare combinedtogethertocontrolmalesterilitygeneexpressing,thenthe bilinearcrossingcanberealized.Soweconstructedoneregulatory system thatcombinedthetetracycline-inducibleoperatorwithTA29 promotertogether.ThissystemcanexertastringentregulationofGUS inthetap