犬猫病毒病临床诊断技术研究进展研究.pdfVIP

2005学术年会 物保护，挽救濒临灭绝动物，保护大自然生态平衡出发，按照世界野生动物保护法和国家野生动物保护 法，象保护人类自己一样保护非人灵长类和各种野生动物，消除人类破坏生态环境的印痕，崇海大自 然，回归大自然。 参考文献 共48篇，从略。 犬猫病毒病临床诊断技术研究进展 田克恭研究员 农业部兽医诊断中o，100094 一、免疫胶体金技术在犬猫病毒病诊断中的应用 {一)免疫胶体金技术的基本原理 免疫胶体金技术的检测原理是以硝酸纤维胰为载体，包被已知抗原或抗体，加人待检样品后，样品 中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合，再通过胶体金标记物与之反应形成红色的可见结果， 从而达到检测目的。 试纸条上依次粘有A：吸水纸；B：玻璃纤维膜，膜上吸附着金标记物；C：硝酸纤维素膜(nitroceU* lose 质控线；D：吸收垫。ABCD首尾相连，当液体标本漓加在A上时，液体即向D处不断扩散，当液体到达 B处时，金标记物被溶解，同时与标本中的抗原反应而形成复合物。液体继续前移至C处，金标记的复 合物再与膜上检测线的抗体结合而呈现红色的线条，多余的金标抗体继续前移至D处。利用胶体金 试纸检测的方式既可以标记抗体，又可以标记抗原；既可以采用标记抗原与待测抗原的竞争方式来检 测抗体，又可以利用标记抗体或标记二抗的双抗体夹心法方式来检测抗原。 目前，该项技术已在医学上得到广泛的应用，大多数人的传染病都已经研制成免疫胶体金检测方 法。在兽医诊断领域也已开始使用，如犬细小病毒、犬癜热病毒临床快速诊断均已开始使用免疫胶体 金快速诊断试纸条。 (二)免疫胶体金诊断技术的特点 1、免疫胶体金技术的优点 ①亲和性好(特异性好、灵敏度高)，准确性高；②稳定性好，批内僦间差小，易于质量控制；③示 踪剂：已胶体金为指示剂，率身形成免疫分析过程后的颜色标记；④操作简便；⑤符号显示结果；⑥单 体操作；⑦无需设备、仪器；⑧摆脱冷链，易运输、储藏；⑨自带质控对照；⑩经济实用。 2、免疫胶俸金技术的缺点 ①灵敏度不如ELISA(仅相对于酶标而言，而酶有生物活性，故有第二批放大过程，使ELISA产 品较金标法产品更为灵敏)；②一般作为定性，不易定量；③若ELISA采用自动化分析仪时，大批量的 集约性的操作，不如ELISA快而方便。 (三)免疫胶体金诊断技术在犬猫病毒病诊断中的应用 1、目前在我国兽医临床的应用情况 2005学术年会 27 胶体金试纸条作为诊断试剂应用于兽医临床，由于它快速、准确，具有高度特异性和敏感性．结果 直观可靠，而且试剂和样品用量极少，无需仪器设备，简化了繁琐的常规操作过程，同时也减少了因操 作引起的误差。虽然在动物医学方面的研究起步较晚，但已经引起兽医界的重视，现在已有用于动物 疫病检测的胶体金试纸条面市。如用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条，检测鸡传染性法氏囊病病毒 的免疫金标试纸条以及检测犬细小病毒、犬瘟热病毒的免疫金标试纸条等。可以预见在未来的兽医临 床，免疫胶体金技术的应用一定会更加广泛。 2、犬细小病毒免疫金标试纸条的临床应用 (1)样品采集与制备 取病犬的粪便样品lg，加生理盐水5ml，充分摇匀后静置5分钟。 (2)操作方法 室温下将试纸条水平放置，取上清液3—5滴，逐滴缓慢滴人试纸条的加样孔(s)内，静置20。30 分钟，观察结果。 (3)结果判定 阳性：试纸在C和T区位置出现两条平行的紫红色(或红色)线； 阴性：试纸只在C区位置出现一条紫红色(或红色)线； 无效：试纸不出现任何紫红色(或红色)线。 (4)注意事项 为确保检测结果准确，请严格按照说明书操作；试纸只能使用一次。请勿重复使用；试纸取出后应 在15分钟内使用；包装袋子损坏或密封破损时，请勿使用此袋中的试纸；请勿将不同批号的试纸及其 试剂混合使用。 二、ELISA技术在犬猫病毒病诊断中的应用 体反应检测体液中的抗原或抗体性物质。用酶标记物进行免疫学检测的方法称为酶免疫测定(enzyme hnked 年代初，以后被称为酶联免疫吸附试验(enz，rmeimm