玉环柚三倍体植株育成技术研究初报研究.pdfVIP

玉环柚三倍体植株育成技术研究初报 陈方永1 洪方云2 罗君琴1 (1浙江省柑橘研究所318020；2浙江省玉环县龙溪乡农技站317609) 摘要本文以异源四倍体体细胞杂种为父本，与单胚性二倍体柑橘品种玉环柚进行有性杂 交，获得玉环柚三倍体植株，并对此进行研究。 关键词 玉环柚异源四倍体体细胞杂种有性杂交三倍体植株育成 1 材料和方法 1．1材料 父本：柑橘异源四倍体体细胞杂种。其中，HR(哈姆林甜橙+粗柠檬)、sR(酸橙+粗柠 檬)、KV(Key来檬+伏令夏橙)由华中农业大学作物改良国家重点实验室邓秀新教授提供， zj(甜橙类+柠檬)为作者引进枝条后经辐射嫁接开花。母本：分别以浙江柑橘研究所王林 试验站、玉环县水利局苔山塘农场的玉环柚作为授粉母本树。上述品种均为扁圆形、单胚、 无籽。 1．2试验方法 1．2．1授粉2002—2004年每年的5月1El～5月6日授于玉环柚母本树异源四倍体 体细胞杂种花粉。 1．2．2胚抢救无菌再生体系的建立参照伊华林的方法稍做修改：授粉后80—100d 左右，每隔10d采摘授粉果实一次，随机取样，抽用10个果，供胚抢救备用。将整个果实放 人75％酒精浸泡12min，无菌水冲洗，置于灭菌滤纸上，切开果实取出种子，剥离幼胚，接入 养，观察出芽情况。 1．2．3无茵苗的增殖将诱导出的胚培苗分别转入下列增殖培养基，观察记录再生芽 1．2．4流式细胞仪倍性分析取约0．5cm2的胚抢救获得的植株的幼嫩叶片置于一个 干净的塑料培养皿中，加入400山细胞裂解液(PartecHR—A)，刀片切碎，放置3min，用 Partee HR．B溶液，染色2min后上 30l上m的微孔膜过滤到测试管中，再通过滤膜加入1．6mL 析仪自动生成。 2结果与分析 2．1 不同发育时期种子生长情况调查 玉环柚授粉后的80d、90d和100d，分别采摘授粉幼果，观察果实内种子的生长情况，结果 ·136· 第四部分试验研究与进展 发现：授粉后80d随机采3个样果获得267粒种子，其中有138粒是种子发育完全的，约占 40．6％，在剩余的198粒退化种子中，发育不完全的和完全退化的种子各占一半左右。而授粉 后100d采果时，同样随机抽取3个果只能获得192粒种子，其中只有13粒是完全饱满的，占 6．8％，其余种子属干瘪或完全退化类型，且在后者又绝大多数是完全退化的种子。 从对授粉后不同时期的抽样采果情况来看，试验柚果实在授粉后90d开始，已随着果实 生长时间的延长，发育不全及完全败育种子的比例在增高。二倍体与四倍体杂交所获的杂 种胚存在早期退化现象，要想得到三倍体植株有必要进行幼胚早期离体培养。同时，这一现 象也说明了玉环柚授于异源四倍体体细胞花粉后的90—lOOd这一时段内是杂种胚完全败 育的一个高峰期。进行杂种胚的胚抢救工作必须赶在授粉试验后的80—90d进行，才可能 保证败育胚在抢救时的成活率相应提高，进而可望获得建立杂种胚的无菌再生体系。 2．2不同授粉方式种子发育情况比较 2003年，于授粉后95d分别采摘授粉果和自然授粉果若干个，室内解剖，查看果实内部 种子的生长发育情况，统计不同授粉方式条件下单果种子数及所含完全发育、退化和完全败 育种子数，结果如表l所示，结果也说明了三倍体合子胚发育有早期退化的现象，必须早期 离体培养才能达到玉环柚三倍体育种的目的。 表1不同授粉方式种子发育情况比较 注：表中种子数均为平均值 杂交授粉柚果实种子的幼胚与自然授粉种子的幼胚进行大小比较发现，授粉果实饱满 种子内残留的胚长一般仅有1．2～3．0ram大小，而自然授粉果实饱满种子除有完整的胚乳 外，其种子内的完全胚长的可达10．5mm。 2．3授粉玉环柚杂种胚无菌再生体系的建立 2．3．1光条件对杂种胚抢救效果的影响试验样果消毒处理后，剥离幼胚接种于MT 记录，结果如表2所示： 表2不同光条件对诱导效果的影响 光条件 15d后 30d后