TAT蛋白转导结构域跨膜递送机理及其应用基础研究.pdfVIP

TAT蛋白转导域跨膜递送机理及其应用基础研究 摘 要 TAT蛋白的转导结构域PTO(残基47-57)能介导外源蛋白跨膜递送进入 细胞，然而迄今为止，有关TAT-PTD的跨膜递送机制仍然不清楚。因此，构 筑并应用模型蛋白，探讨 TAT-PTO跨膜递送的机理及其应用，对充分发挥 TAT-PTD在临床治疗中的作用具有重要意义。 为构筑模型蛋白，本研究先通过PCR扩增 目的基因TAT-GFP，把鉴定正 确的目的基因 TAT-GFP与质粒 pGEX-2T连接，构建了带有 GST标记的 pGEX-TAT-GFP质粒。将其转化大肠杆菌BL21后，再把在大肠杆菌BL21大量 表达的GST-TAT-GFP通过GS-4B亲和色谱纯化，得到了分子量约为54.RD 的融合蛋白GST-TAT-GFP. 在此基础上，本文用荧光显微镜和荧光分光光度计来检测纯化后呈活性 状态的融合蛋白GST-TAT-GFP在不同条件下与体外培养的细胞作用，以探讨 TAT-PTD的跨膜递送机理。实验结果表明:①GST-TAT-GFP能有效跨膜递送 进入多种细胞，不仅能进入细胞质，而且可以定位到细胞核周围。②其递送 动力学特性如下:对时间和浓度有依赖关系，15min内就可以跨膜递送进入