一株深绿木霉产芥子酶酶学性质.pdf

江苏农业科学 2012年第40卷第 10期 殷 蒙，马 艳，常志州，等．一株深绿木霉产芥子酶酶学性质[J]．江苏农业科学，2012，40(10)：309—311 一 株深绿木霉产芥子酶酶学性质 殷 蒙 ，马 艳 ，常志州 ，陈双林 (1．南京师范大学生命科学学院，江苏南京210046；2．江苏省农业科学院农业资源与环境研究所，江苏南京210014) 摘要：从实验室筛选的绿色木霉 (Trichedermaatroviride)(菌藏号：5609)液体发酵菌丝体中提取芥子酶。探讨将 绿色木霉芥子酶用于生物熏蒸的可能性，以提高生物熏蒸防治土壤连作障碍的效果，结果表明：芥子酶的最适反应温 度为30℃，且在低温条件下酶的活性较易保持 ，最适反应pH值为6，最适底物浓度为3．7mmol／L；低浓度的抗坏血酸 对芥子酶有激活作用 ，高浓度的抗坏血酸反而会抑制酶的活性，添加4mmol／L的抗坏血酸可使酶活性增加为原来的 3．65倍，不同浓度的NaC1溶液对芥子酶活性没有明显的影响。深绿木霉的芥子酶可应用于pH值中性土壤与盐土环 境，相对于植物源芥子酶具有更宽的适宜范围。 关键词：深绿木霉；芥子酶；酶学性质 ；抗坏血酸 中图分类号：Q814 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2012)10—0309—03 芥子酶(又称 一硫代葡萄糖苷酶)是一种用以催化硫代 绿木霉活化后转接到新的PDA平板上，置于 28℃恒温培养 葡萄糖苷水解的酶，大多存在于十字花科植物中。研究发现， 箱中培养。将培养3d的新鲜菌丝用直径为7mm的打孔器 微生物体内以及一些以含有芥子酶的植物为宿主的昆虫中也 打孔后，接种菌碟至新鲜配制的灭菌PDB培养基 中，然后摇 存在芥子酶，例如Aspergillu~sp．NR46F13…、啤酒酵母 、交 床培养 180r／min。培养5d后用纱布过滤菌丝体，并用超纯 链孢霉属 的Alternariabrassicae、茎点霉、拟步行虫 (Tenebrio 水冲洗 3遍。添加约5倍菌丝湿重的PBS缓冲液混匀后，用 molitor)、黄条跳 甲(Phyllotretaundulate)、甘蓝蚜 (Brevicoryne 超声波细胞粉碎机 (南京先欧生物科技有限公司JY92一II) brassicae)、小菜蛾 (Plutellaxylostella)、粉纹夜蛾 (Trichoplusia 对菌丝体进行破壁处理 (功率200W，时间10min)。破壁后 n)等 。硫苷葡萄糖苷在芥子酶催化下的降解产物异硫 将菌丝细胞破碎液置于4℃冰箱中浸提 1h，在4℃条件下 氰酸酯对农业生产中的寄生线虫 、镰孢菌 (Fusarium) J、 4000r／min离心 15min。上清液过细菌滤器后 ，为芥子酶的 立枯丝核菌 (Rhizoctoniasolani) 、根腐丝囊霉 (Aphanomy- 粗酶液，于 一20℃条件下保存备用。 ce$euteiches) 、疫 霉 (Phytophthoraspp．) 、畸雌 腐 霉 1．2．2 芥子酶活性测定 取5mmol／L黑芥子酸钾 100 ， (Pythiumirregulare) 等多种重要土传植物病原菌和杂草昆 加入 100txL粗酶液，3omin后置于沸水浴中5min以灭活 虫等具有很强的抑制杀生作用。因此 ，富含硫苷葡萄糖苷的 酶，测定产物葡萄糖的生成量 ，进而计算出酶活。葡萄糖的测 十字花科植物以生物熏蒸的形式被应用于农业生产中的病虫 定方法 ：铁 一邻菲罗啉分光光度法。葡萄糖的测定步骤 ： 害防治。目前国内外对于植物体内的芥子酶已进行了不少研 取0．0011mol／L葡萄糖标准溶液置于25mL容量瓶内，分别 究，但对于微生物体内的芥子酶研究则相对较少。本研究以 加入0．5mL0．O1mot／LAgNO 溶液、0．75mL0．1mol／L 筛选到的可以产芥子酶的深绿木霉 (Tfichedermaatroviride) NaC1溶液，混匀后沸水浴内加热 10min，冷却到室温；再加入 菌株为研究对象，对其所产芥子酶的酶学性质进行了研究，旨 0．75mL0．0O4mol／L硫酸铁铵溶液，2．5mLpH值4．5乙酸 在为其应用