酶工程第17章兰州大学酶工程酶在医学方面的应用.ppt

第十七章 酶在医学方面的应用 酶工程在医学方面的任务 酶功能与疾病的关系 帕金森综合症的病理及治疗 帕金森综合症治疗药物美多芭 抗菌素 芬布芬 Fenbufen 对药用酶的要求 酶在体外的作用 一、药用酶 1．药用酶的分类 尿激酶 尿激酶的药用机理 尿激酶对纤溶酶原的激活 尿激酶的给药方式 尿激酶的来源和降解 组织型纤溶酶原激活剂 链激酶 药用酶的分类 凝血酶的使用 药用酶的分类 激肽释放酶 药用酶的分类 L-天冬酰胺酶 注射L-天冬酰胺酶的副作用 2．药用酶的固定化和给药方法 药用酶的固定化方式 药用酶的红细胞固定法 口服药用固定化酶 微型植入式注射泵 微型植入式注射泵 药用酶的体外应用 人工肾 人工肾 药用酶在体内的分布 二、诊断用酶 酶在疾病诊断方面的应用 不同来源的酶性质不同 1．建立酶反应系统 显色底物 显色底物 指示反应的选择 肌酸激酶的测定 酶法测定甘油三酯 2．底物测定原理 达到所述百分转化率所需的 C0 : S0比率 提高反应程度和确定反应时间 底物测定原理 3．酶活性测定原理 4．干试纸条 尿素干试纸条的结构 5．酶电极 电化学传感器 葡萄糖酶电极 葡萄糖酶电极 青霉素酶电极 酶电极的优点 6．酶法免疫测定（EIA） （1）均相反应 酶标抗原 底物标记抗原 酶抑制剂标记抗原 （2）非均相反应 ELISA设备 测抗体 非均相反应测抗体 测抗原 双抗夹心法测抗原 测抗原 测抗原 （3）标记酶的选择 标记酶的选择 常用的标记酶 酶标仪 全自动酶标仪 全自动洗板机 酶标板 将纯化的抗原固定到微孔板的孔中，加入不同稀释度的抗血清，待测抗体即和固定的抗原结合，洗涤后，加入酶标的二抗（抗抗体），再洗去未结合的多余酶标二抗，加底物显色、比色，色度与抗体的量成正相关。 酶标抗抗体 待测抗体 固定抗原 a. 双抗夹心法：将抗体固定到微孔板的孔中，加入待测抗原，待测抗原与固定的抗体结合，再加入酶标抗体，酶标抗体与待测抗原结合，洗去未结合的多余酶标抗体，加底物显色，比色，色度与待测抗原的量成正相关。若上述酶标抗体换成非酶标抗体（必须与固定抗体不同，如分别为鼠和兔来源），洗涤后再加上酶标二抗，可提高检测的灵敏度。此法只适合于测定具有两个以上抗原决定簇的抗原。 配合体外循环装置将酶固定在微囊、玻璃球、尼龙管、纤维素、胶原蛋白等上面，安装在透析器内，解决异体蛋白在体内引起的过敏问题。 人工肾是体外循环装置中最成功的代表。它是利用体外循环将患者的血液通过透析器除去代谢废物（如尿素）后重新返回体内的一种装置。老式的人工肾需要体积庞大的透析液，既不经济又不方便。1968年，T.M.S.Chang加以改进，将通过透析器的含尿素的透析液用泵输入到一个玻璃柱内。柱的一端装有尿素酶微囊，另一端装有活性碳或离子交换剂。当透析液通过玻璃柱时，其中的尿素受尿素酶作用转变为二氧化碳和氨，氨被活性碳吸附，二氧化碳回到血中由肺排出体外。 活性碳也能除去血液中的其它废物。整个装置可以降低血液中的尿素达80％。此装置的优点是体积小型化，透析液可以循环使用，使人工肾成为实用化的一种医疗器械。 根据酶微囊颗粒的大小，可以使微囊集中在某一器官或组织。用人白蛋白制成的酶微囊，直径在15～30μm以上，静注时可通过心脏，进入肺部微血管，在此可集中99％的酶。如果是直径为1～3μm的微囊，则静注后可到达网状内皮系统，在此可集中90％的酶。再小于1μm的颗粒则可在肝（80％）、脾（5～8％）、骨髓（1～2％）中依比例分布。 使微囊表面带上特殊物质（抗体、可识别物质）与特定组织细胞表面的抗原或受体反应，达到定向给药的目的。 诊断用酶是用来检测体内某些与疾病有关的代谢物质或与疾病有关的酶活性变化，从而诊断病情。酶法检测有快速、简便、正确、灵敏等优点，因而发展很快。对诊断用酶的要求比药用酶低些，因其不用于体内，可以不考虑其抗原性和毒性；对纯度的要求是只要不含有能干扰所需反应的物质即可，如脱氢酶中不能含有NADH氧化酶，激酶中不能含有肌激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶中不能有6-磷酸葡萄糖酸。 肾癌及膀胱癌活性升高 葡萄糖醛缩酶 坏血病、贫血等活性升高 碳酸酐酶 肝炎、癌症时活性下降 磷酸葡萄糖变位酶 癌症、肝病、心肌梗死等活性升高 醛缩酶 癌症、肝病、心肌梗死活性升高 乳酸脱氢酶 胃癌时活性升高；十二指肠溃疡时活性下降 胃蛋白酶 肝炎、心肌梗死等活性升高 谷丙、谷草转氨酶 佝偻病、软骨化病、骨瘤、甲状旁腺机能亢进时活性升高 碱性磷酸酶 前列腺癌、肝炎、红血球病变时活性升高 酸性磷酸酶 胰脏、肾脏疾病时活性升高；肝病时活性下降 淀粉酶 测定尿酸含量，治疗痛风 尿酸酶 测定胆固醇含量，治疗皮肤病、支气管炎、气喘；肝病时活性