红嘴鸥产酸克雷伯菌的生物学特性.docx

红嘴鸥产酸克雷伯菌的生物学特性赵思越段纲项勋代飞燕常华*云南农业大学动物科学技术学院，昆明650302摘要采集红嘴鸥的粪便并进行细菌分离培养，首次分离到产酸克雷伯菌。红嘴鸥产酸克雷伯菌在普通琼脂、麦康凯、伊红美蓝（EMB）、营养肉汤及SS琼脂培养基上均可生长，多数为单个存在或两两相连，少数依傍聚堆成锯齿状排列。本菌为无鞭毛、无芽孢的革兰氏阴性杆菌，能利用葡萄糖（产酸产气）、可发酵乳糖、甘露醇、麦芽糖及蔗糖；靛基质试验为阳性，MR阴性，VP试验阳性，不产生H2S，可利用尿素及西蒙氏柠檬酸盐，但半固体琼脂（动力）试验为阴性；本菌对氧氟沙星最为敏感；小白鼠对本菌易感，且腹腔接种易感性高。关键词红嘴鸥；产酸克雷伯菌；生物学特性克雷伯菌属细菌归属于肠杆菌科，分5个种：产酸克雷伯菌（K.oxytoca）、肺炎克雷伯菌（K.pneu-moniae）、植生克雷伯菌（K.planticola）、土生克雷伯菌（K.terrigena）和变形克雷伯菌（K.preteus）[1]。前两者可导致人畜患病，后三者一般不导致人畜患病。国内外已从兔、乌鸡、鸡、孔雀等动物体内分离到克雷伯菌[2-5]，目前国内外对肺炎克雷伯菌的研究比较多，而有关产酸克雷伯菌的报道甚少。产酸克雷伯菌是重要的条件致病菌，在自然界曾从植物及水生环境中检出，也存在于人和动物肠道，可导致人畜患病[6]。到目前为止，未见季节性迁徙候鸟红嘴鸥感染产酸克雷伯菌的报道。红嘴鸥（LarusridibundusLinnaeus）是分布于欧亚大陆和北美洲东部沿海的一种候鸟，在欧亚大陆繁殖，到非洲北部、印度、菲律宾和日本一带越冬。在中国其繁殖地在新疆、内蒙、黑龙江、吉林等地，而越冬地却很广阔，北起东北地区的南部，西抵西藏南部，东至台湾，沿海各省常见[7-8]。昆明位于中国西南云贵高原中部，属北纬低纬度亚热带高原山地季风气候，受印度洋西南暖湿气流影响，年温差较小，年平均气温14.6℃。昆明滇池地区和翠湖公园是红嘴鸥在云南的主要越冬地之一，从每年10月中旬至次年4月中旬滞留约半年[9]，已成为昆明人的老朋友，但是红嘴鸥在迁徙过程中是否会感染传染性疾病，这些病原菌是否会通过密切接触而导致人群的感染，是否会通过水源污染而导致产酸克雷伯菌的暴发流行还未被研究。为此，笔者对红嘴鸥的粪便进行细菌分离培养，首次检查到有产酸克雷伯菌的存在，并对此株产酸克雷伯菌的生物学特性作了研究。1材料与方法1.1材料1）试验样品及试验动物。采集云南昆明滇池红嘴鸥粪便50份，健康的昆明系雌雄种小白鼠20只（购自昆明医科大学实验动物中心）。2）主要仪器。MCV-131BNF无菌超净台、MLS-3020高压灭菌器、MOV-212电热恒温干燥箱（SANYO/日本）、恒温培养箱、电子分析天平（上海）。3）培养基。根据禽类肠道正常菌群的特点，选收稿日期：2014-11-20基金项目：云南省野生禽类重大动物疫病监测*通讯作者赵思越，男，1989年生，硕士生。·20·试验研究养殖与饲料2014年第12期表1产酸克雷伯氏菌在不同条件下的培养特性培养基培养温度/℃培养时间/h培养特性普通琼脂平板3729373745293745293745373732323248323232323232323248菌落大小适中、灰白色隆起、圆形菌落菌落较小、粉红色、表面光滑、圆形菌落中部蓝紫、外部粉红的黏稠样菌落粉红色、黏稠、鼻涕样、粗大的菌落生长不良粉红色黏稠菌落、表面湿润、菌落较小粉红色黏稠菌落、表面湿润、菌落较小生长缓慢、粉红色黏稠菌落、表面湿润、菌落较小菌落较小、灰白色隆起、圆形菌落菌落大小适中、灰白色隆起、圆形菌落菌落大小适中、灰白色隆起、圆形菌落粉红色菌落、隆起、表面湿润、培养基变为红色菌落及培养基变为黄色伊红美蓝琼脂平板（EMB）麦康凯琼脂平板营养肉汤琼脂平板SS琼脂平板用肉汤培养基、血清普通琼脂培养基、LB琼脂培养基、伊红美蓝（EMB）琼脂培养基、麦康凯培养基等选择培养基（购自上海生工生物试剂有限公司）。1.2方法1）细菌形态学和培养特性观察。将采集的红嘴鸥粪便分别接种于普通肉汤培养基，置于37℃下培养36～48h，观察其生长情况；挑取肉汤培养基中的菌液分别接种于普通琼脂、麦康凯及伊红美蓝（EMB）琼脂培养基上，每种培养基均匀分成3组，分别置于29℃、37℃、45℃下培养36～48h，观察其生长情况；挑取菌落涂片染色镜检，观察其形态并测定其大小。2）生化试验。将分离出的菌种，接种于肉汤培养基扩增，并分别接种于各种生化试验培养基中，置于37℃培养48～96h，测定其生化反应。3）药敏试验。将该菌种均匀接种于普通琼脂平板上，以各种药敏试纸（头孢拉定、庆大霉素、阿米卡星、呋喃妥因、氨苄西林、新霉素、妥布霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、阿莫西林、头孢噻肟）进行药物敏感性