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微生物实验步骤 实验一 显微镜的使用，微型动物的计数，微生物形态观察 一、实验目的 熟悉光学显微镜基本结构和用途； 掌握低倍镜、高倍镜使用方法; 掌握使用显微镜观察微生物的形态； 掌握微生物直接计数法中常用的方 法——血球计数法 学习血球计数器的构造、原理及使用方法 二、实验器材 显微镜 玻片标本 酵母菌 载玻片、盖玻片、擦镜纸 血球计数板 待测水样 无菌毛细管，吸水纸 三、实验内容 1.光学显微镜的构造 机械系统部分 光学系统部分 照明系统部分 机械部分 3.显微镜使用注意事项 显微镜持取正确姿势 使用前后的镜头维护 注意标本的放置方向 观察时注意双目齐睁 高倍镜不得使用粗调 严禁拆卸任何部件 使用后恢复机器原貌 (二)微型动物的计数基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的，可根据观察到的数目换算成单位体积的总数目，此法计得的是菌的总数，故称总菌计数法 血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌数 操作步骤 稀释：将水样进行适当稀释，菌液不浓，可不必稀释。 镜检计数室：在计数前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则进行清洗。 加样品：盖上盖玻片，用毛细管将菌液由盖玻片边缘滴一小滴，让其自行渗进计数室。不可有气泡。 4 显微镜计数：先低倍镜找计数室，后高倍镜计数。一般以每小格5—10个菌体为宜。常选四角和中央五个中格计数。格线上菌体只数上线和左边线。同法计另一室。 　5 清洗血球计数板：自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，自行凉干。镜检，洗净为止。 　６记录 7 计算 计数时，若采用一大方格为25个中方格的血球计器，5个中方格的总菌数设为A，菌液稀释倍数为B，则1mL溶液中的总菌数（个）为： A/5×25×104×B﹦5×104A·B 因为 1mL﹦1cm3﹦1000mm3 如果是16个中方格，设5个中方格的总菌数为A1，菌液稀释倍数为B，则1mL溶液中的总菌数（个）为： A1/5×16×104×B﹦3.2×104A1·B 实验二 微生物大小的测定，各菌种的观察， 油镜的使用 三、基本原理 微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微尺两部分。 目镜测微尺：是一块可以放入接目镜内的特定圆形玻璃片。玻片中央是一个细长带刻度的尺，等分成50或100小格，每个等分线间距为0.1mm。由于不同显微镜的放大倍数不同，故目镜测微尺每格实际代表长度随显微镜的不同而不同。因此在使用前必须用物镜测微尺校正，以求得在一定接物镜及目镜等光学系统下，目镜测微尺每格所代表的实际长度。 物镜测微尺是一块中央部分刻有精确等分线的载玻片。每一刻度间距为10um即把1mm等分为100格，是专门为校正目镜测微尺实际数值用的。 四、方法与步骤 1、目镜测微尺的校正 1）将目镜测微尺装入目境内，刻度朝下，并将物镜测微尺朝上置载物台上。 2）用低倍镜核对，至能清晰看到物镜测微尺。 3）改用高倍镜或油镜对焦后，转动目镜，使目镜测微的刻度和物镜测微尺刻度平行。 4)两尺吻合后，先使两尺的一端某一刻度完全重合，然后再寻找另一端第二条重叠的刻度 5)计下两吻合刻度间，目镜测微尺与物镜测微尺的格数。按下列公式算出目镜测微尺每小格所代表长度。 目镜测微尺每格长度（微米） 两吻合刻度间物镜测微尺格数×10μm = 两吻和刻度间目镜测微尺格数 例如：目镜测微尺的5格等于物镜测微尺的2格，则目镜测微尺1格=（2×10）/5=4微米 2、微生物大小测定： 1）制作水样浸片 2)取下镜台测微尺，将“水浸片”标本置于载物台上。 3）先用低倍镜观察到目标后，转换高倍镜测量酵母的大小，测量10—20个菌体，求出其平均值。 四、测量结果记录： 目镜测微尺——格=物镜测微尺——格 目镜测微尺1格= 微米 微生物长度=目镜测微尺平均——格 = ——微米 宽度=目镜测微尺平均——格