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RNA标记 RNA标记是将标记物（如放射性同位素、荧光素或酶）共价地连接到RNA，通过检测标记物，进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛，在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求： 操作简单，灵敏度高 不影响碱基配对的特异性 不影响RNA活性 对酶促反应活性无影响或影响不大 检测方法具有高度灵敏性和高度特异性 标记物对人体无害 RNA标记方法 按反应机制分如下四类： 直接标记法 加尾标记法 基于逆转录反应的标记方法 基于RNA克隆扩增的标记方法 常用于RNA标记的方法按标记物性质分为 放射性同位素标记 32P、35S、3H 非放射性标记 半抗原 荧光素 化学发光物质 非放射性标记 半抗原 目前用于标记RNA的半抗原主要有地高辛和生物素两种： 地高辛 生物素 5 末端标记法　 ???????? 5‘ 末端标记法是通过化学方法将地高辛标记于寡核苷酸的5’ 末端。首先在5‘ 末端连接上一个氨基连接臂残基,将合成的寡核苷酸纯化后,再使DIG-NHS 与5’ 末端的氨基残基发生共价结合,从而形成标记RNA。 DIG-RNA 5’ 3’ 5’ 3’ DIG Anti-DIG-AP CSPD 化学发光底物 BCIP AP-DIG-RNA 5’ 3’ 5’ 3’ 化学显色底物 X光片曝光 化学发光信号 蓝紫色 地高辛标记RNA检测方法 生物素 用生物素标记RNA的方法常见的是用生物素与UTP结合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTP、ATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶SP6、T7等经体外转录合成标记RNA。此法也多用于RNA探针的合成。 生物素标记RNA检测方法 常利用生物素和链霉亲和素特异结合的方法 Biotin RNA 5’ 3’ Biotin AP Biotin AP Biotin AP 荧光素 目前常见的荧光染料包括： 异硫氰酸荧光素（FITC） 四甲基异硫氰酸罗丹明 四乙基罗丹明 得克萨斯红 藻红蛋白（PE） 花青类染料（Cy3、Cy5） 新型荧光素如量子点（半导体纳米晶体）。 RNA的3’末端-OH 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 高碘酸氧化 F RNA的3’末端醛基 荧光标记RNA F 检测 聚丙烯酰胺凝胶电泳