纸层析和纸上电泳.pptVIP

* * 实验十九 纸色谱 实验二十 氨基酸的纸 上电泳 一、目的与要求： 1、了解纸色谱的基本原理。 2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操 作。 3、了解电泳的基本原理，学会纸上电泳 的操作方法。 4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基 酸。 二、基本原理 （一）纸色谱是一种分配色谱。滤纸作为载体，纸纤维上吸附的水为固定相，与水不相混溶的有机溶剂作为流动相。 当样品点在滤纸的一端，使流动相从有样品的一端上行，通过毛细管作用，流向另一端时，依靠溶质在两相间的分配系数不同而达到分离。极性大的组分在固定相中分配得多，随流动相移动速度慢，极性小的在流动相中分配得多，随流动相移动速度快一些。 三、纸色谱实验步骤： 1、点样； 2、展开； 3、显色与结果处理——计算Rf值(P61)。 在离滤纸底边约1cm处，用铅笔划一条线，并划上AB两点，用毛细管蘸取氨基酸点于点上（A为丙氨酸；B为混合液），风干后再点一次，控制直径不超过2-3mm。往染色缸中加入5mL纸层展开剂，并把滤纸挂于胶塞的小钩上，放入染色缸中，调节滤纸高度，使滤纸不粘缸壁，样点在液面上。静置40分钟。当展开剂润湿到滤纸的3/4时，取出滤纸，趁湿划出展开剂的前沿，然后用电吹风吹干。用铅笔画出斑点的轮廓，确定斑点中心，用尺量出距离，计算。（注意：展开剂不用倒掉） 纸色谱图 （二）在一定的条件下，带电的质点在电场作用下，向着与其所带电荷相反的电极移动，这种现象称为电泳。 不同氨基酸在同一pH值的溶液中，所带的电荷不同。在同一电场中，带不同电荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同，因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电泳时，由于各个氨基酸移动的方向和距离都不相同，从而达到分离鉴定的目的。 四、氨基酸的纸上电泳实验步骤： 1、点样与润湿； 2、电泳； 3、显色； 4、结果处理——标明正、负极和氨基酸。 在滤纸中间，用铅笔划一条线，并划上ABC三点，用毛细管蘸取氨基酸点于点上（A为天冬氨酸；B为混合液；C为精氨酸），风干后再点一次，控制直径不超过2-3mm。往电泳槽两边的槽中加入200mL电泳展开剂，将滤纸放入槽中彻底润湿，然后横跨放于电槽中间。打开电泳仪（U=300V,I=100mA，T=40min）盖上槽盖，静置40分钟后关掉电泳仪。用镊子取出滤纸，放于普通滤纸上把展开剂吸干，然后用电吹风吹干，喷上染色剂，再吹干。用铅笔画出斑点的轮廓，确定斑点中心，用尺量出距离，计算。（注意：用来吸水的普通滤纸实验后留在桌上，不要丢）