植酸酶制剂储存稳定性研究的新方法研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全固发酵工程学术讨论会论文集 植酸酶制剂储存稳定性研究的新方法 冉字舟， 潘 力’， 罗立新， 王斌， 陆一鸣， 胡 杰 (华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510640) 摘 要：酶制剂储存稳定性是酶应用过程中最常遇到的实际问题，由于研究周期跨越时闻 长，样品保存困难，研究手段缺乏。本文在系统探讨糖类和金属盐类物质对植蘑鬯酶制剂热稳 定性的保护作用，添加金属盐离子对植酸酶制剂的热稳定效果明显优于各种糖类物质的保 护效果，其中以添加金属盐硫酸锾的热稳定效果最佳，糖类物质淀粉最适合作为固体酶制剂 的载体．同时创新性的引入药物制剂稳定性的恒温加速试验研究方法用于酶制剂储存稳定 性的研究，比较糖类和金属盐添加剂对植酸酶制剂储存稳定性的影响，为酶制剂储存稳定性 的研究提供新的研究方法。 关键词：储存稳定性；金属盐离子；糖类；恒温加速试验 随着生物技术和酶工程技术在工业上的普遍应用，酶在工农业生产、医药卫生、环境 保护等方面的作用越来越显得重要。而作为酶应用过程中最常遇到的实际问题就是酶 的稳定性问题，包括在应用加工过程、储存过程中，直接影响酶的最终应用效果。以植酸 酶(Phytase)为例，它作为一种环保和新型的饲料生物酶添加剂，由于其在解除植物性饲 料中植酸的抗营养作用和饲料高效利用方而的功用而倍受关注[1]，但植酸酶在实际应用 中遇到了一些障碍，植酸酶的活性在制粒的过程中损失较大[2]。提高饲用酶热稳定性的 方法有很多[3]，对于植酸酶，常用的方法有自然选择法、蛋白质工程法、化学修饰法、添加 酶稳定性添加剂、制备包被型颗粒酶“1等。其中以添加酶稳定性添加剂手段最为简便和 实际，本文较系统的研究了糖类和金属盐添加剂对植酸酶制剂热稳定性的影响。而目前 对酶制剂储存过程稳定性研究的手段不多，由于研究周期跨越时间长，样品保存困难。 本文根据药剂学中对各种药剂储存稳定的研究方法如恒温加速试验等，创新性的引入酶 制剂储存稳定性研究。 1 材料与方法 1．1实验材料 植酸酶液体制剂购于肇庆市华芬饲料酶有限公司。氯化钙，硫酸镁，硫酸锌，硫酸 铵，可溶性淀粉，葡萄糖，糊精，蔗糖，麦芽糖，乳糖均为分析纯试剂。 1．2实验方法 通讯作者：潘力，博士。副教授，主要从事工业微生物、医药微生物及生物化工方面的研究． Tel：020E--mail：btlipan@scut．edu；cn 冉宇舟等：植酸酶制荆储存稳定性研究的新方法 543 无机磷所需的酶量为一个酶活力单位。 1．2．2植酸酶酶活测定：植酸酶的酶活检测方法参见文献[5～刀。 1．3植酸酶热稳定性测定 1．3．1植酸酶活残留率的测定：添加一系列浓度的糖类和金属盐类到植酸酶液体制剂 中，在60℃下水浴加热2min，冰水冷却后以相应不加热的酶活力作对照L100％)，测定植 酸酶活残留率。 1．3．2酶制剂的恒温加速试验[81 (1)将样品置于不同温度的恒温器(如恒温水浴、恒温箱)中，间隔一定时间取样(如 表1)，测定植酸酶的酶活残留率(C)。 表1 样品加速温度和取样时间 (2)根据酶活残留测定结果，作logC一-t图，确定反应级数。 (3)求出不同温度下酶制剂失活反应速度常数K值。 温度，求出所需温度下的K值。 (5)根据K值计算出酶制剂理论保存有效期。 2 结果与讨论 2．1 糖类对植酸酶制剂热稳定性影响 多羟基化合物可以通过氢键与植酸酶的酶蛋白表面分子相联接，也可以通过氢键有 效的与外部水分子相连接，使酶蛋白分子稳定[9]．本文对蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精、葡萄 糖、可溶性淀粉等各种糖类进行了植酸酶在60℃下水浴加热2min的热稳定性初筛(在此 条件下液体植酸酶制剂的酶活残留为o)，仅有2％的可溶性淀粉、0．5mol／L的葡萄糖具 有一定保护作用，酶活残留率分别为39％和10％，其余各种糖对植酸酶没有保护作用， 酶活残留均为0。本文进一步对不同浓度的葡萄糖和可溶性淀粉对植酸酶的保护作用进 行了研究，结果如图1。 如图1(A)所示，当添加葡萄糖浓度达到0．5mol／L时，其植酸