04蛋白质工程制药PPT.ppt

基因家族改组 DNA改组的不足：从单一基因出发，得到的随机点突变率很低，且有益突变的积累相对缓慢 在自然界中，不同物种同源基因本身就是具有非常丰富的变异，如果加以利用，就可以大大地加速基因在体外的进化速度——基因家族改组（DNA family shuffling） 基因家族改组 S3 蛋白质工程制药实例 蛋白质工程在新药研究中的应用 胰岛素的蛋白质工程研究 蛋白质工程在新药研究中的应用 1、提高药效活性 2、提高靶向性 3、提高稳定性、改善药代动力学特性 4、提高工业生产效率 5、降低蛋白药物引起的免疫反应 6、获得具有新功能的蛋白分子 7、获得特定蛋白的拮抗物或类似物 8、模拟原型蛋白分子结构开发小分子模拟肽类药物 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 I型糖尿病： II型糖尿病： 胰岛素抵抗（IR）为主，伴胰岛素相对缺乏；以及胰岛素分泌缺陷，伴IR 由于细胞介导的胰岛B细胞自身免疫性破坏，导致胰岛素绝对缺乏 胰岛素的蛋白质工程研究 闭环系统：自调控 竞争解吸附作用 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 中国4000万，全球1.5亿患者 急性并发症： 酮症酸中毒（I，昏迷、死亡） 非酮症高渗性昏迷（II） 低血糖反应（心慌、手抖、饥饿、出冷汗） 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 中国4000万，全球1.5亿患者 慢性并发症（可遍及全身各重要器官）： 心血管疾病、慢性肾病 视网膜病变、神经病变 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 1982年，重组人胰岛素上市 ——第一个基因工程药物！ 第一个完成序列测定的蛋白质（1958年） 第一个人工合成的蛋白质（1965年） Sanger 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 每100L发酵液就能产生5g胰岛素，使其价格降低了30%-50%! 提取4-5g胰岛素需要100Kg胰腺 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素在临床应用时存在的问题 1、在正常生理情况下胰岛素在体内是不断地分泌的，但不能连续不断地注射胰岛素 2、皮下注射胰岛素时，吸收得也很慢，注射后1.5-2小时，体内胰岛素水平还未能达到高峰，这就会导致高血糖；3-5小时之后胰岛素水平仍在继续上升，这又会导致低血糖 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素在临床应用时存在的问题 3、糖尿病病人一般需要每日四次注射给药 胰岛素的蛋白质工程研究 蛋白质工程技术对胰岛素的改造 1970S初，英国的Hodgkin等、我国的梁栋材等，分别用X-射线晶体衍射法进行了高分辨率的三维结构分析，胰岛素的蛋白质工程研究奠定了基础 04 蛋白质工程制药 S1 蛋白质工程制药概述 S2 蛋白质工程的基本技术 S3 蛋白质工程制药实例 S1 蛋白质工程制药概述 从基因工程药物到蛋白质工程药物 蛋白质工程的诞生、概念 蛋白质工程的基本过程 蛋白质分子设计 基因工程药物?蛋白质工程药物 1982年第一个基因工程药物：重组人胰岛素 重组蛋白存在问题： 1、稳定性差：体内半衰期短 2、药理活性不够强：使用剂量偏大 3、毒副作用大 4、生产工艺复杂 ?蛋白质工程药物 蛋白质工程的诞生 1970S末，Smith等人建立了寡核苷酸点突变改变DNA序列的方法 1982年，一些实验室用此技术来改造蛋白质分子，研究蛋白质的功能 1983年，Ulmer发表了题为“Protein Engineering”的专论 目前已应用于医药领域，并有多种产品上市 已上市的蛋白质工程药物 1、体内半衰期短 2、药理活性不够强 3、毒副作用大 4、生产工艺复杂 蛋白质工程的概念 蛋白质工程（Protein Engineering） (第二代基因工程) 是以蛋白质结构功能关系的知识为基础，通过周密的分子设计以及DNA重组技术，把天然的蛋白质改造成合乎人类需要的新的突变蛋白质(mutein)的一项技术。 蛋白质工程的概念 内涵： 1、从DNA水平改变基因，改造蛋白质 2、一个或多个氨基酸残基 结构域 全新蛋白质 3、有目的地改造，获得期望功能 ——强调分子设计 4、结合DNA重组技术 从不同尺度改造 蛋白质工程的基本过程 蛋白质工程的基本过程 1、分离纯化所需改造的目的蛋白 2、对蛋白进行氨基酸序列测定、X射线晶体衍射分析、核磁共振分析等——结构和功能信息 3、根据结构和功能信息、生物信息学