急性长时间运动对大鼠心肌线粒体NOSNO，COX和HIF1的影响.pdfVIP

丁树哲1，许 纲1，高彩暇1，缪明永2 (1．华东师范大学体育与健康学院运动生化研究室，上海200062； 2．第二军医大学基础医学部线粒体功能研究实验室，上海200433) 1研究目的 物中心提供)，体重在200～230g之间。平均为215±23g，随 一氧化氮(N0)是一个疏水的气态自由基，它的低反应机分为对照组7只，急性长时间运动后即刻处理组8只，急 性和疏水性使得No可以在细胞内外扩散，甚至扩散到100性长时间运动4h后处理组8只。 pm远的组织中，起到自分泌和旁分泌信号分子的作用。细胞 1．2运动模型 内主要的疏水结构是线粒体，在心肌中细胞体积的35％是线 全部大鼠进行适应性游泳三天，每天在30。C水温的水池 粒体，这样线粒体就成为N0的主要细胞池。近年来。NO和中游泳20rain。第四天运动的两组按各自体重的3％负重游 线粒体之间的关系受到高度重视[1]，NO信号分子通过与靶泳，适应性游泳20min左右，出水2rain，入水继续游泳持续 180 蛋白结合发挥其调节的作用．在线粒体上具有多个与N0发 min以上，平均游泳时间达到249±54min。 生反应的模体，如血红蛋白基团和硫醇[2。3]。而线粒体的脂质 1．3主要试剂与仪器 双层就可以调节线粒体对N0的利用[4]。 线粒体中生成的N0是细胞产生NO的重要来源。试剂均为国产分析纯。NO和NOS测定试剂盒由由南京建成 Giulivi等人[5]首先在肝细胞中发现Mt内存在着独立于胞浆 为上海捷兰生物技术有限公司提供，DNTP、Taq酶由上海博 的完整的L一精氨酸(L—Arg)／一氧化氮合酶(NOS)／N0生成 系统，随后的研究证实了线粒体中具有特定类型的NOS，即 亚生物技术有限公司提供。随机引物由宝生物工程(大连)有 限公司提供，RNA酶抑制剂、DTT由华美生物工程有限公 线粒体NOS(mtNOS)。许多研究表明心肌细胞中的总NO 司提供，M—MLV由Promega公司提供。 量有56％来自于mtNOS[6]，心肌mtNOS的活性折合为N0 氧电极仪、电子分光光度计、低温差速离心机均由第二 的产生量是0．7～1．1nmol／min·mg蛋白[7]。NO本身是一 个双向调节分子，有浓度依赖的特性，NO在心肌细胞的功能 军医大学线粒体功能研究实验室提供。TGL一16B台式高速 活动中具有极其重要的作用。N0的作用具有时相上的差 离心机为上海安亭科学仪器厂制造，TC一96／T／H(a)基因扩 异，如它的即时作用是抑制线粒体的呼吸功能。它的长时效 增仪为杭州大和热磁电子有限公司制造。 应(2～6天)是提高线粒体的呼吸功能和氧化代谢，从而在某 1．4心肌线粒体的提取 些类型的细胞中诱导线粒体的生物发生【8]。 实验动物分别于安静态、运动后即刻和4h后断头处死 NO可以在不同水平对线粒体产生调节作用。由于N0迅速取出心脏，用分离介质(O．25mol／LSucrose，5mmol／L Tris，1．0mmol／LEDTA。0．176 7．4)冲洗净血 具有舒张血管的作用，可以调节组织中的血流，间接地为线 mol／L，pH 污，剔除结缔组织、剪碎．加10 粒体的呼吸提供底物；又对线粒体呼吸产生的热量进行再分 m1分离介质，电动匀浆器匀 200 配；NO可以直接地调节氧与血红蛋白的结合与释放，从而调 浆1 rpm，上下两次。加10ml介质，(o～4)C离心。700