应力诱导细胞有丝分裂方向的研究.pdf

应力诱导细胞有丝分裂方向的研究’ 胡青华米强 扬春庄逢源 北京航空航天大学生物工程系。北京，100083 关键词 有丝分裂方向应力纤维单轴拉伸Mc3T3 一、背景综述 细胞的有丝分裂是细胞增殖的重要手段之一．动物细胞的增殖主要靠有丝分裂完成．有丝分裂阶 段，细胞完成了所有信息的自我复制并一分为二．形成两个子细胞．具有极性的动物细胞通过控制有丝 分裂方向可使子代细胞分裂成两个相同的子代细胞(对称分裂)．或者两个具有不同功能的子代细胞(不 对称分裂)[1j。因此动物细胞有丝分裂的意义不仅仅在于增殖基体的细胞数量，还与胚胎发育、组织器 官形成和损伤组织的修复均有一定关系．此外近年来的许多研究表明细胞分裂方向与干细胞的分化相 关t多种组织(如皮肤、小肠等)的干细胞在分裂过程中通过保持子代细胞于性或启动分化．来保持其数 metric 影响有丝分裂器的取向仍然是个谜。目前的研究表明。酵母细胞的有丝分裂方向受到细胞内微丝排列 方向的调控b】，鼠受精卵的形状可调控其后的有丝分裂方向n]，细胞外基质的形状可诱导细胞的有丝分 裂方向[归等．这些研究成果给人们一个信息t细胞的形状或黏附状况是细胞有丝分裂方向的决定因素 之一．细胞的形状是细胞自身环境的物理信号．决定细胞有丝分裂方向的下游信号是一系列的分子事 件[I]，在这些例子里，有丝分裂方向的确定是一个物理一生化耦合过程．在动物体内．力学环境和力学 信号是细胞的物理环境以及细胞感受到的物理信号中重要的一种．细胞的力学环境对细胞的有丝分裂 方向有何种影响?这个问题关系到力学环境在胚胎发育、组织修复、于细胞分化等问题中扮演的角色， 行诱导，探讨了在单轴应力拉伸作用下细胞有丝分裂方向与单轴拉伸应力的关系问题． 二、实验装置与方法 1．单轴技伸装量 本实验所采用的单轴拉伸装置是在Paul 仲装置原理如图1所示，该装置由旋转装置(Screwtop)，拉伸室外壁(CuIture 进装置作用于硅胶膜上，使硅胶膜产生等双轴拉伸应变．旋转装置每旋转一圈在硅胶膜上造成的应变 进装置推进时该细条装硅胶膜内产生单轴拉伸应变．实验时施加应变之后应保证细条状硅膜与整块硅 市科技新星计崩资助项目(2005A13)． ·22· 图1 (·)等双轴拉伸装置剖面图，硅胶膜用橡胶圈固定于推进装置上．同时起到密封作用．细胞培养于硅 腔膜上表面．培养蔽位于推进装置内部l(b)改造的单轴拉伸装置分■圈．仍利用整块硅腔麒的密封 性能以储存培养藏．将一块条状硅胶膜树于整块硅腔膜之上。当条状硅胜膜足够细(O．5cm)时．条状 膜上承受单轴拉仲应力 膜之间有相对滑移，以避免由于两块膜牯连造成的细条状硅膜的侧向应变。 五药品、试剂和设备 E丑gle’s 71X(日本)． Probes公司)；DAPl；倒置荧光显徽镜0lympus 3．细胞培养 灭菌的拉伸装置上．24小时后待细胞贴壁后对硅胶膜施加拉仲应变．拉伸48小时后观察细胞应力纤 维排布及有丝分裂方向．应力纤维与有丝分裂方向会受到细胞与细胞外基质之阃及细胞之间的相互作 用影响．因此在培养细胞过程中细胞接种密度应尽量低，以便选取独立生长的细胞进行观察和统计． 4．细胞微丝及细胞核荧光标记 ·23· 及紫外激发，以4倍、20倍、40倍镜观察． S．统计方法 选取独立生长的细胞进行细胞骨架馓丝和细胞核的观测．处于有丝分裂前期和前中期的细胞染色 体并束排列在赤道板附近，因此通过核染色无法确定其有丝分裂方向。对于冉{f期的细胞甚至无法区分其 是分裂期还是单纯的细胞核拉长．而有丝分裂中期至来期的细胞便于用核染色法观察．因此统计分裂 期细胞时本文选取该时期的细胞．缀细胞棱染色，以分裂期的细胞核连心线或者赤道板的中垂线确定 细胞有丝分裂方向，采用手工方法在拍摄到的细胞图片上指出应力纤维的主方向及有丝分裂方向·并采 用免费版软件。书童量角器”测量出有丝分裂方向、应力纤维方向与拉伸应变方向之间的爽角。按夹角 制柱状图． 三、实验结果 1．8％单轴拉伸应变条件下细胞形态的