蛇足石杉内生真菌的分离与鉴定.pdf

2011年 10月 皖 西学 院学 报 0ct。，2011 第27卷第5期 JournalofWestAnhuiUniversity V01．27 N()．5 蛇足石杉内生真菌的分离与鉴定 闵长莉 ，柴翠英 (1．皖西学院生物与制药工程学院，安徽 六安 237012；2．安徽省植物生物技术实训中心，安徽 六安 237012) 摘 要：从健康蛇足石杉的茎中分离内生真菌，用PDA培养基分离纯化菌株，对照真菌鉴定手册，根据菌株的茵落形态、大 小、颜色、生长速率以及茵丝体和孢子的形态特征进行鉴定。从蛇足石杉的茎中分离出5株内生真菌，经鉴定它们分别属于链格 孢霉属、镰刀茵属、无孢类群和青霉属。 关键词：蛇足石杉；内生真菌；分离；鉴定 中图分类号 ：Q934．1 文献标识码 ：A 文章编号：1009--9735(2011)05--0011--03 蛇足石杉 (Huperziaserrata(Thunb)．Trey．)， 化与菌种鉴定，以期为进一步研究蛇足石杉内生真菌 又名千层塔、蛇足草、宝塔草等，是一种珍贵的药用蕨 能否合成石杉碱甲奠定基础。 类植物。在民间，蛇足石杉全草被用于治疗跌打损 l 材料与方法 伤、瘀血肿痛、精神分裂、肌肉痉挛、胆结石引起的剧 1．1 材料 疼等。外用可治痈疽、疥疮，并可灭虱及臭虫等[1]。 1．1．1 植物材料来源 蛇足石杉植株于2011年5 近年来的研究发现，蛇足石杉的活性成分石杉碱甲具 月采 自安徽天堂寨景区海拔约 1lOOm处，经妥善处 有很强的抑制胆碱脂酶活性，具有提高学习记忆力和 理后带回实验室供试。 改善老年记忆功能的效果，并且对治疗重症肌无力和 1．1．2 仪器与试剂 恒温恒湿培养箱(PYX一150H 早老性痴呆均有显著疗效[2]。临床上石杉碱甲已用 — A，科立仪器)；电热蒸汽压力消毒器(Yx一450，上 于治疗各种原因和不同年龄组的老年人记忆减退和 海三申医疗器械有限公司)；洁净工作台(SW—CJ一 早期老年痴呆症，目前国际上已将石杉碱 甲列为第二 1C(U)，苏州安泰空气技术有限公司)。 代乙酰胆碱酯酶抑制剂之一[3]。由于石杉碱甲在全 1．1．3 培养基 PDA固体培养基：将200g新鲜的 马铃薯洗净去皮，切成小块后加入适量水，煮沸 1h， 草中含量甚微，且其结构复杂，所以人工合成十分困 纱布过滤，取滤液，加人葡萄糖 20g、蛋白胨 2．Og、琼 难。蛇足石杉资源稀少，目前还不能人工栽培，药品 脂 20g，加水定容至 lO00mI，1．05kg／cm 高压蒸汽 生产要完全依赖野生资源，必将直接影响石杉碱甲进 灭菌 30min即可。 一 步的开发与利用，同时还会造成蛇足石杉资源的枯 1．2 方 法 竭。因此，研究蛇足石杉中石杉碱 甲资源的新来源显 1．2．1 内生真菌的分离方法 将所采集健康的蛇足 得尤为重要 。 石杉植株在 自来水下洗净后，将其茎部剪成约 2cm 植物内生真菌(Endophytiefungi)是指生活在植 长的小段，依次将茎置于75 乙醇表面消毒30s，无 物体内或一定阶段处于植物体内，包括菌根真菌和植