大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的重组分泌表达.pdfVIP

第 30卷 第 3期 渔 业 科 学 进 展 Vo1．30，NO．3 2 O 0 9 年 6月 PROGRESSIN FISHERY SCIENCES Jun．，2009 大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白 基 因在毕赤酵母中的重组分泌表达 吴成龙 史成银 黄 健 孔晓瑜 (农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 ，青 岛266071) (教育部海水养殖重点实验室 中国海洋大学水产学院，青 岛 266003) 摘 要 依据大菱鲆红体病虹彩病毒 (Turbotviralreddishbodyiridovirus，TRBIV)主要衣壳蛋 白(Majorcapsidprotein，MCP)基 因序列，设计 了一对特异性 引物 ，并在正反 向引物中分别引入 EcoR I和 NotI酶切位点，从而将 PCR扩增得到的TRBIVMCP基 因双酶切后定向克隆到真核表达载体 pGAPZaA的GAP启动子的下游位点，并电转化入大肠杆菌DH5a宿主茵内。经抗生素 Zeocin筛 选、PCR、EcoRI和 NotI双酶切 以及测序分析 ，构建 了含有 a—factor信 号肽 的真核重组表达载体 pGAPZaAMCP。重组表达质粒 pGAPZaAMCP经AvrII单酶切后 电转导入 毕赤酵母 X-33中，挑 选阳性克隆，提取表达上清经 SDS—PAGE和 Western-blot免疫印迹分析。结果显示，TRBIVMCP 基因在酵母中成功实现分泌表达 。阳性重组酵母菌经过72h诱导培养后 ，重组TRBIVMCP的表达 量高达 60．2ug／ml左右 。 关键词 大菱鲆红体病虹彩病毒 主要衣壳蛋 白 毕赤酵母 表达 中图分类号 $943；$948 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2009)03—0055—07 Expressionofmajorcapsidproteingeneofturbot reddishbodyiridovirusinPichiapastoris W U Cheng—long’ SHICheng—yin HUANG Jie KONG Xiao—yu (KeyLaboratoryforSustainableUtilizationofMarineFisheryResources，MinistryofAgriculture， YellowSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Qingdao26607) ( KeyLaboratoryofMariculture，MinistryofEducation，OceanUniversityofChina，Qingdao266003) ABSTRACT A pazrO±PCR primers，withEcoR landNotlrestrictedenzymesitesIn the5’ and3’endrespectively，wasdesignedaccordingtothemajorcapsidprotein(MCP)geneoftur— botviralreddishbodyiridovirus(TRBIV)．AfterPCR amplification，arecombinantexpression vectorincluding0一【factorpeptideand6×HistagwasconstructedbyinsertingTRBIV MCPgene intoGAPpromoterdownstream ofpGAPZaA directly．TheconstructedvectorpGAPZaA MCP waslinearizedbyAvr Ⅱ，andthentransformedandint