长白山赤杨丛枝菌根真菌DNA分子多态性的研讨.pdfVIP

摘 要 丛枝菌根是自然生态系统中分布最广的内生菌根，在促进植物生存与生长、 植被恢复以及生物多样性保护等方面有着非常重要的作用。随着现代分子生物 学技术的发展，丛枝菌根真菌的研究得到空前发展。大量DNA分析新技术在丛 枝菌根真菌的分子遗传、分类鉴定、种间及种内亲缘关系、菌株持久性等方面得 到应用，与传统菌根研究方法相比，表现出巨大的优越性。但相比国际而言，国 内针对菌根真菌分子水平上的研究发展较为缓慢。 本项研究对中国吉林长白山东北赤杨、西伯利亚赤杨、色赤杨从枝菌根真菌 DNA分子多态性进行初步研究，试图揭示其一般规律，为更好地利用这一资源 提供理论依据。 通过比较与筛选，得到丛枝菌根真菌痕量DNA快速、简便的提取纯化方法 — 改良CTAB法。经PCR检测，所得DNA满足进一步研究的要求。 根据丛枝菌根真菌 18srRNA小亚基核基因片段的特点，利用 “科”特异 性引物进行半巢式标记PCR(LabelledPrimers-PCR,LP-PCR)扩增，再经单链构 象多态性 (Single-StrandedConformationPolymorphism,SSCP)分析来检测其 DNA分子在 “种”水平上表现出的多态性。 研究结果显示:丛枝菌根真菌在 “种”的水平上并未随各宿主的变化表现出 丰富的多样性;长白山地区赤杨属植物至少有东北赤杨、西伯利亚赤杨和色赤杨 三个树种在自身 “属”的水平上与共生的球囊霉科 (Glomaceae)至少一个 “种” 的丛枝菌根真菌，即根内球囊霉 (Glomusintraradix)，在 “种”的水平上表现出 不相关于宿主海拔高度的某种相互选择性。 关键词:赤杨，丛枝菌根真菌，半巢式LP-PCR-SSCP,DNA分子多态性 Abstract DNAPolymorphismof姗FofAnusinChangbaiMountain LiYiye(Microbiology) DirectedbyProfessorFengShu Arbuscularendomycorrhiza(AM)isthemostuniversalendomycorrhizaexisting intheecosystem.Theyplayveryimportantrolesonsurvivalandgrowthofplants,ve- getationresuming,biodiversityprotection,etc.Modernmolecularbiologytechnology hasgreatlyacceleratedtheresearchesofmycorrhizalfungi.Sometaxon-selective primersthatwereintendedtobespecifictofungiandbasidiomycetesrespectively havebeendesignedandtestedtocharacterizefungalsymbionts衍amplificationof specificsequencesinthenuclearribosomalunit.Onthebaseofstudyonarbuscular endomycorrhizaofAlnusofChangbaiMountain,thepaperattemptedtorevealthe DNAmolecularpolymorphismofthesymbioticarbuscularendomycorrhizalfungifor theeffectthatmakebetteruseofthefungiresource. Ihaveestablishedanddevelopedasimpleandrapidimprovedprotocolusing CTABfordirectlyextractingandpurificatingtracearbuscularendomycorrhizalfungi (AMF)DNArfomarbuscularendomycorrhiza.Basedonthenucleargenesequences codingforthesmallsubunitrRNA,semi-nestedLabelledPrimers-PCR(LP-PCR) weredonewiththetaxon-specificprimers.Theamplifiedproductsaret