电针对大鼠腰骶髓段脊髓内γ干扰素样免疫反应阳性物质表达的影响研究.pdfVIP

电针对大鼠腰骶髓段脊髓内y干扰素样 免疫反应阳性物质表达的影响 胡格1穆祥1欧阳五庆2陈树林2 杨佐君1孙志宏2赵慧英2匿董囵 (1．北京农学院动物科技系北京102206；2，西北农林科技太学陕西扬陵712100) 摘要：应用免疫组织化学SP法探讨了．电针对大鼠腰骶髓段脊髓内IFN-Y样免疫反应阳性物质分布 的影响。结果表明，免疫抑制+电针组的脊髓内免疫阳性细胞的大小、形态和分布与正常对照组相～致， 经统计学处理无明显变化(P0．05)；免疫抑制组在背角胶状质内的免疫阳性细胞数量明显少于正常对照 组，经统计学处理有显著差异(P(o．05)，其它部位略有下降，但没有显著变化(P0．05)：电针组与正常 对照组相比无显著差异(P)o．05)。说明CY可降低脊髓内IFN．Y的合成，经电针刺激免疫抑制大鼠后海 穴后脊髓各部位免疫阳性细胞数量总体上呈现上升趋势，尤其是背角胶状质内阳性细胞明显增多 (Po．05)．说明，电针刺激后海穴能提高免疫抑制大鼠腰骶髓段脊髓内IFN-Y样免疫反应阳性物质的表 达，而对正常对照组无明显影响，这对揭示针灸的作用机理以及针灸与神经免疫调节之间的相关性研究 具有重要意义。 关t词：电针：后海穴；Y干扰紊；免疫组织化学；大鼠 Y干扰素(IFN．y)作为一种细胞因子，是由多种细胞产生，并具有抗病毒、抗肿瘤 和调节免疫反应等多种生物学功能的糖蛋白Ⅲ。针灸能改善机体免疫功能，具有双向良性 调节作用。有研究表明，针刺后海穴能促进IFN．Y的分泌嘲。本实验从形态学方面观察电 针对腰骶髓段脊髓内口FN-Y样免疫反应物质表达的影响，探索针灸作用的可能机制以及针 灸与神经免疫调节网络之间的关系。 1材料和方法 1．1实验动物及分组 健康青年sD大白鼠32只，雌雄均有，体重200___209，购自第四军医大学实验动物 研究中心。应用分段随机分组法(blocked 即正常对照组、电针组、免疫抑制组和免疫抑制+电针组。 1．2动物处理 1．2．1免疫抑制模型的建立 环磷酰胺(cY)具有较强的免疫抑制作用‘“。本实验用医用环磷酰胺，给16只sD 大鼠腹腔连续注射三次(1次，d)，剂量为100mg／kg，建立免疫抑制模型。其中8只作为免 疫抑制组，另8只作为免疫抑制+电针组。其余大鼠腹腔注射同剂量的生理盐水。 ·364· 1．2．2针刺方法 所有实验大白鼠均在安静环境下统一喂养。穴位选位于大鼠肛门与尾根之间凹陷处的 后海穴。将电针组和免疫抑制+电针组SD大鼠固定后，用80％酒精进行后海穴消毒，蒋 5mm针灸针垂直捻转进针，针刺深度为5mm，再连接G6805．2A探穴针灸治疗仪(由上 海医疗仪器厂生产)，参数选为间断疏密度(频率2Hz)，刺激强度3．0V，共诱导30min， 以大鼠后肢轻微抖动为宜，每日1次，连续针刺7d。正常对照组和免疫抑制组大鼠同一时 间同样的方法只固定，不进行电针刺激。 1．3取材、切片 四组实验动物SD大鼠均按同一实验程序处理：将大鼠保定，用1％戊巴比妥钠 C30mg／kg)腹腔注射麻醉，开胸，经左心室插管人主动脉，先用400ml生理盐水快速冲 洗，继用4％多聚甲醛(pH7．4)400～500ml灌注固定，取出脊髓、垂体、卵巢、睾丸和 胰腺等内分泌器官，修成组织块。按动物器官分别编号，人梯度酒精脱水，二甲苯透明， 常规石蜡包埋，连续切片，片厚6～8um。隔7张连续取2张，贴于APES处理的载玻片 上，烘干。 1．4免疫组化SP法操作程序 素标记的第二抗体(c液)，室温下孵育15rain；(5)链亲合素—过氧化物酶溶液(D液)， 室温下孵育15rain。然后用DAB蓝色呈色液呈色。除第二步骤后漂洗5min外，其它各步 o．01mol／LPBS、0．03％叠氮钠和0．2％TritonX．100的血清稀释液配制。最后按常规脱水、 透明、封片。 1．5砸N．y样免疫反应阳性细胞数量测定 在10×(或40×)物镜和10×目镜(内装测微网格)下，每一张切片上分别计数0．0l mm2个测试格面积中的内侧、中央和外侧共三处免疫反应阳性细胞(N／0．01mm2)。取其平 均值(当细胞压在边线时，只计数压上边线和左边线者，压下边线和右边线者不计入[31、， 表示口烈．Y样免疫反应阳性细胞的数量。这样计数每组5张切片内IFN—Y样免疫反应阳 性物质，取其平均值，用方差分析法对所得数据进行统计学处理。 2结果