采用RAPD技术筛选马口鱼性别差异相关分子标记.pdfVIP

第33卷第 l期 水 产 养 殖 Vol-33，No．1 2012年 1月 1日 JournalofAquaculture Jan．1，2012 doi：10．3969~．issn．1004—2091．2012．01．010 曩豫聃 邱 晴 ，罗 文2 (1．绍兴市水产技术推广站，浙江 绍兴 312000；2．绍兴文理学院 生命科学学院，浙江 绍兴 312000) 摘 要 ：选用SBSA和SBSB两组随机引物(各20条)分别对马口鱼卵巢DNA和精巢DNA进行RAPD扩增，并用 1．5％ 的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果表明，在40条随机引物中，有 1l条引物可以扩增出明显的雌雄性别差异条带，条带范 围以SBSA5、SBSA6、SBSA9、SBSAI6、SBSA19、SBSA20、SBSB2、SBSB3、SBSB9、SBSBI6、SBSB17为主。运用RAPD筛选 获得马口鱼性别DNA标记将有助于了解其调控雌雄性别发生的差异基因，为进一步的遗传育种提供基础。 关键词 ：RAPD；性别差异；分子标记 中图分类号：Q173 文献标识码：A 文章编号：1004—2091(2012)01—0038—05 马 口鱼(Opsariichthysbidens)是广泛分布于东 存备用。 亚江河湖泊中的特有的鲤科鱼类，其繁殖力强，生 RAPD随机引物购 自北京鼎国昌盛生物技术有 长快，产量较高，为普遍食用野生溪流杂鱼之一。但 限责任公司，采用SBSA和SBSB两组(各20条) 马口鱼雌雄个体间存在生长速度、性成熟年龄、体 引物 。蛋 白酶K购 自Takara公司；TaqDNAPolv— 色、体型、个体大小等差异，性成熟后生长速度显著 merase，购 自Fermentas公司 ；PCR试剂盒和 DL 下降，大部分能量消耗在性腺发育上 ，致使可食部 2000DNAMarker购 自Takara公司；基因组 DNA 分减少 ，肉质变差。鱼类遗传育种通常是通过鉴别 的抽提试剂，购 自上海易利生物科技有限公司；琼 性染色体组成来指导繁殖，但马口鱼性染色体分化 脂糖凝胶电泳试剂，购 自Takara公司。 程度较低，早期的雌雄个体在外部形态上差异不 1．2 实验方法 大，性别分化在胚胎发育过程中易受环境影响，导 按照试剂公司说明书的指示对 RAPD随机引 致性表型与遗传基础不一致。因此，寻找简便快速 物进行溶解，将差异性片段从银染胶上准确切下， 的遗传标记对水产育种具有重要的意义。 转至 0．5mL离心管中，加入 5O 无菌双蒸水中， RAPD技术即随机扩增多态 DNA技术 ，是美 95℃加热 15min；在PCR管中依次加入去离子超 国科学家 Williamsf11和 welshtZl~,究小组在聚合酶链 纯水 33．5 L，10xPCR缓冲液 5．0IxL，dNTP4．0 式反应技术的基础上发展起来的，是一种用于检测 L，MgC12(25mM)3．0 L，随机引物 1．0 L，样 品 基因组 DNA多态性和基因组遗传标记的方法。目 1．0IxL，Taq酶(1．0U／I~L)2．5txL。混匀，3000r／rain 前 已被广泛应用于系统发育研究、动植物种类鉴 离心 15S，置于PCR仪 中，加盖。 定、基因图谱构建、种群的遗传分析、人类基因组研 反应条件 ：94℃预变性 5min，94℃变性 40 究等领域[31。实验利用 RAPD技术检测马口鱼雌雄 s，37℃退火 45s，72cI=延伸 1min，40个循环，最后 基因组 DNA间的差异，拟筛选出马 口鱼雄性性别