生物分离技术实训.pptVIP

实训一、L-胱氨酸的制备 目的要求 原理 材料用具 清 洗 用60℃左右的热水，加少量洗涤剂，搅拌洗涤4～6min，洗去吸附在毛发上的油脂，然后捞出，再用清水冲洗干净，滤干，放在通风处晒干或烘干备用。 水 解 按毛发的量，量取2倍30%工业盐酸，加入到玻璃钢或搪瓷水解罐中，通蒸汽加热到70～80℃，立即投入清洗晒干的毛发，继续加热，间歇搅拌，使温度均匀，升温到100℃开始记温，每隔0.5h记温一次，在1～1.5h内升温至110℃左右（即罐温），以后继续维持罐压14.6kPa，水解13h左右，水解期间要有回流装置，保证水解酸度，使水解完全，水解时间可从水解罐内溶液温度达100℃时计算。 水解完全后，停止回流，立即趁热过滤，先用玻璃布抽滤除去大的黑腐质，然后再用双层纱布抽滤，将滤液移到中和锅内，滤液用1：10盐酸冲洗2～3次，准备中和。 中 和 将过滤好的滤液趁热在搅拌下加入浓度为30%～40%的氢氧化钠溶液，当中和到pH达4.0时，停止加碱液，然后改用乙酸钠饱和溶液中和到pH为4.8左右，停止搅拌，静止10～12h。用涤纶布过滤沉淀物，甩干或吊干，即得粗品。中和时温度应保持在50℃左右，而且要在0.5h内完成。 提 纯 称取适量的胱氨酸粗品，加入粗品量13%～14%的工业盐酸，搅拌30min左右，等粗品全部溶解后，在加入糖用活性炭，加热到90～98℃，在此温度下恒温搅拌2～3h，然后过滤脱色液，滤液加热到80～85℃，在搅拌下加入30%氢氧化钠溶液，调节pH至4.8时，静置。使结晶沉淀完全。 精致 干燥 称取适量胱氨酸提纯后的粗品，加入5倍量的1：12的盐酸，加热到40℃时，加入5%骨炭粉，升温到60℃，保温搅拌1h。然后用布氏漏斗过滤，滤液在经过3号垂熔漏斗过滤，滤液应无色透明 将溶液移入搪瓷缸中，搅拌下加入10%氨水调节溶液pH至4.8，静置5～6d，即有胱氨酸精品析出，过滤出结晶，用无离子水洗至无氯离子，干燥即得成品。 思考 题 实训二、制备谷光甘肽 目的要求 原 理 材料用具 提 取 将干酵母置于不锈钢锅中，在搅拌的条件下加入3倍体积的蒸馏水，再加入6倍体积沸腾的蒸馏水，升温至90～100℃，保持10 min，然后速冷至2～10℃。 粗 提 液 用5mol／L硫酸调节pH值至2.8～3.0，冷冻离心（3000 r／min, 5～10℃） 15 min，收集离心液。在离心液中加0.5％硅藻土助滤，抽滤得到黄色抽提液待用。 粗 提 液 层 析 抽提液上732阳离子交换树脂柱，流速6 mL／min，然后用1 mol／L硫酸洗脱，洗脱流速2 mL／min,25 min左右开始收集5mL流出液,进行快速含量测定,当流出液滴定值超过0.2 mL／mL时，开始收集，滴定值低于0.2 mL／mL时停止洗脱。 粗 提 液 层 析 （1）732阳离子交换树脂装柱 将市售732阳离子交换树脂磨碎，筛选出60～80目。物理方法处理后，先以4倍树脂体积的2mol／L盐酸搅拌浸泡2h，反复用水洗至近中性后，再用4倍体积的2mol／L氢氧化钠溶液搅拌浸泡2h，反复用水洗至近中性后，再用4倍树脂体积的2mol／L盐酸搅拌浸泡2h，最后水洗至中性。按要求装柱后用1 mol／L硫酸平衡备用。 （2）GSH含量快速测定（碘量法） ①取5 mL待测样品，置于250 mL锥形瓶内，加入5 mL 2％偏磷酸溶液，1 mL 5％碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂，用0.001 mol／L的碘酸钾溶液滴定至溶液由无色变为蓝色止。 ②计算滴定值（碘酸钾溶液／待测样品，mL／mL） 沉 析 将洗脱液倾入搪瓷桶中，在搅拌的条件下加入溶液体积10倍的冷丙酮（2～8℃），然后静置沉淀过夜，过滤收集沉淀。 干 燥 将沉淀置于真空干燥器中干燥，即得成品。 思考 题 实训三、锌盐沉析法提取胰岛素 目的要求 原理 材料用具 预 处 理 将冻胰脏块用刨胰机刨碎成片，备用。 提 取 将冻胰片100g置于不锈钢锅中，加入300m L 82％乙醇（W/W），在10～13℃加入12 mol／L硫酸，调节pH 2.8～3.0，搅拌提取40min。加入6mol／L盐酸调pH至2.0，继续搅拌提取2.5 h，离心（3000r/min）15 min，残渣加入65％乙醇150mL，用6 mol／L盐酸调pH至2.0，10～13℃搅拌提取2 h，离心（3000r/min）15 min分离残渣。合并两次提取