水疱性口炎病毒N基因的克隆及在原核中的高效表达研究.pdfVIP

水疙性口炎病毒N基因的克隆及在原核中的表达 摘 要 本论文由两部分构成，一是利用RT-PCR技术克隆出水疙性口炎病毒 (VSV)的N基 因，二是利用大肠杆菌原核表达系统，通过基因重组技术高效表达出N基因。主要实验 和结果如下: I以VSV鸡胚呈纤维细胞毒为材料，参照已发表的VSV基因组序列，设计1对引物， 采用反转录PCR(RT-PCR)扩增出VSVN基因，将之连接于克隆载体pGEM-T载体后，转化 感受态细胞DH5a，经37℃过夜培养，挑取阳性克隆，将PCR和酶切鉴定为阳性的重组质 粒测序，比较测序株，INDwild株。tsG31株，HR株相应核昔酸序列和氨基酸序列同源 性，其核普酸同源性高达99%;氨基酸同源高达99%，进一步证实了VSVN基因的高度保 守性。 2.设计一对分别带有EcoRI和XhoI酶切位点的表达引物，从以上实验构建的重组 质粒中扩增出VSV的N基因，分别与克隆载体pGEM-TVector连接并转化，阳性克隆扩 增后提取重组质粒 pGEM-T-N1eEcoRI和 XhoI双酶切 pGEM-T-Nl以及表达载体 pET-30c(+)，以产生粘性末端。纯化回收后，将之与PET-30c(+)连接，并分别转化大肠 杆菌BL21(