木棉银杏的组织培养研究方案.docVIP

木棉银杏的组织培养研究工作总结 03应生 李厚程 2005年6月25日 概况:这个学期本人在植物组织培养方面做了木棉和银杏的组织培养研究工作。我观察过木棉树和银杏树，发现木棉树枝条的分生生长能力不是很强，在一枝枝条的腋芽点上很少分生芽点，而银杏虽然基本上有分生的腋芽芽点，但是长势十分缓慢或只长从叶，所以我设想利用诱导愈伤组织，然后再吧愈伤组织诱导分化成小苗，从而达到增长的目的。诱导愈伤组织需要幼嫩的树枝，但是在我观察的同时我还发现木棉树每年新长的出来的树枝较短，不能满足材料的需要；还有顶芽有类似托叶的东西包被着，这使得在灭菌的时候很难达到目的。所以木棉的愈伤组织的诱导我采用木棉的花药进行诱导，材料的问题虽然已经得到解决，但是采用花药愈伤组织又受到季节的影响，木棉树的开花期在2~3月，花期很短只有一个多月而已，如果要采用花药进行诱导就要抓住时间。 木棉的植物组织培养 1.1木棉属于木棉科木棉属，主产于美洲热带，在我国主要分布在广东、、、、℃下处理四天。 1.3.2由于花蕾有花萼包被着，所以在灭菌接种是要达到灭菌大目的并不是十分困难，只用75%的酒精擦洗花蕾的表面即可，然后用灭菌了的解剖刀和镊子剖取花蕾剪取花药进行接种。我总共接种了30瓶，有一瓶受到真菌的污染，可能的原因是接种过程中的人为的污染造成的污染，总的来说这种灭菌接种的方法还可以。 1.4愈伤组织的诱导 外植体接种后,一周后花药增大,表面出现裂痕,有类似愈伤组织的物质形成,肉色,透明发亮,随着时间的延长花药不断的变大,类似愈伤组织的物质不断的增多,但是由于培养基使用的激素只有2.4-D,再经过一个星期后,类似愈伤组织的物质开始变化,肉色的表面开始出现褐色,开始死亡。所以利用花药诱导愈伤组织时，若激素只用2.4-D的话一定要及时将愈伤组织转接到诱导分化的培养基上。 不同的基本培养基,不同浓度的2.4-D对花药愈伤组织诱导的影响都有所不同(见下表)。 序号 基本培养基 2.4-D浓度 花药数 愈伤组织形成情况 1 MS 0.1 20 不整齐 2 MS 0.2 20 不整齐 3 MS 0.5 20 整齐 4 N6 0.1 20 不整齐 5 N6 0.2 20 不整齐 6 N6 0.5 20 不整齐 从表中可以看出,用MS+2.4-D0.5的培养基诱导所得的愈伤组织的形成最好最整齐。 1.5诱导组织分化成苗 通过器官发生重新形成的芽称为不定芽。愈伤组织形成后，诱导愈伤组织分化成苗，要使用一定的量的细胞分裂素和生长素，浓度范围在0.1~4.0只间,通过实验最后确定激素的配合和用量。培养基配方如下表： 序号 基本培养基 BA IAA 1 MS 2.0 .02 2 MS 3.0 0.5 3 N6 2.0 0.2 4 N6 3.0 0.5 但是由于糖浓度的在使用中突然降得太低（由10%降到3%），愈伤组织细胞的渗透压承受不了，使得细胞壁破裂最终导致细胞死亡。 1.6结果 由于在诱导分化时将所有的诱导所得的花药愈伤组织全部接到分化培养基上了,已没有其他的愈伤组织可以再使用,而且木棉花的花期已过,使的木棉的组织培养工作只能到此为止。 2 银杏组织培养 2.1银杏有叫白果树,是我国的特产,浙江天目山地区有野生,现广泛栽培于广东以北沈阳以南的广大地区。具有较高的观赏价值和药用价值,木材可做雕刻、建筑、家具材料，种仁可食用或药用。其繁殖方法有播种、嫁接、扦插、分蘖，但这些繁殖方法的繁殖速度都比较慢，还不能满足市场的需求，用组织培养的方法可在短时间内获得大量的无菌苗，从而能迅速的扩大种植面积。 2.2外植体的选取和预处理 2.2.1选取 取带茎节的银杏茎段为外植体,外植体来源于我校校内的生物园，5月20日天气晴朗的中午,在生物园剪取银杏比较幼嫩的枝条,然后用洗衣粉刷洗花蕾的表面后用水冲洗干净，放到冰箱中4℃下处理一天。 2.2.2外植体的预处理 不同的预处理方法的污染率和成活率都不同(见表格) 编号 灭菌处理方法 接种瓶数 污染瓶数 污染率% 成活瓶数 成活率% 1 75%酒精8秒钟2%次氯酸钠5分钟0.1%升汞5分钟无菌水冲洗4次 5 5 100 0 0 2 75%酒精8秒钟2%次氯酸钠10分钟0.1%升汞8分钟无菌水冲洗4次 5 4 80 1 10 3 75%酒精10秒钟2%次氯酸钠10分钟0.1%升汞8分钟无菌水冲洗5次 5 2 40 3 60 4 75%酒精10秒钟2%次氯酸钠15分钟0.1%升汞10分钟无菌水冲洗4次 5 0 0 0 0 综上可见:采用第三种对外植体进行灭菌处理,即: 75%酒精10秒钟2%次氯酸钠10分钟0.1%升汞8分钟无菌水冲洗5次的灭菌处理方法处理材料可获得低污染率、高成活率的初代培养瓶数。 2.3愈伤组织的诱导