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抗体-微球偶联物的制备方法研究 ? 558?黑龙江医药Heilong~iangMedicineJournalVoL24No.42011 穿膜肽一抗体一微球偶联物的制备方法研究 王启辉,刘金华,周洁,冷静 1.广西医科大学免疫学教研室;2.广西医科大学第一附属医院泌尿外科(南宁530021); 3.广西中医学院(南宁530001) 摘要目的:探讨制备穿膜肽一抗体一微球新型药物传送系统的可行性.方法:采用N一琥珀酰亚胺基一3一 (2一吡啶二硫)一丙酸酯(SPDP)交联法将穿膜肽一增强型绿色荧光蛋白融合蛋白(CPPs—EGFP),牛血清白蛋白微 球(BSA—NS),乙肝高效价免疫球蛋白(HBIg)分别采用一次偶联法和二次偶联法两种交联方案进行共价交联,采用 还原和非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和免疫荧光法评价穿膜肽,抗体,微球问的交联.结果:两种 交联方案刺备的穿膜肽一抗体一微球偶联物,SDS—PAGE还原电泳均可见在低分子量端形成三条蛋白条带,非还原 电泳均未见条带;在不同激发波长的荧光显微镜下,均可见微球表面分别发出绿色荧光和红色荧光.结论:应用SP- DP交联剂,无论是一次偶联法还是二次偶联法均能够将穿膜肽,抗体,微球有效地进行偶联,为进一步研究穿膜肽一 抗体一微球新型药物传送系统的特性奠定了基础. 关键词:抗体;穿膜肽;牛血清白蛋白;微球;蛋白偶联;SPDP 中图分类号:R392文献标识码:A文章编号:lO06—2882【2011)04—558—04 StudiesOilPreparationMethodofCCPs———Antibody?—- NanospheresConjugates WangQihui,etal Departmentofimmunology,GuangxiMedicalUniversity(Nanning530021,China) Abstract:Objective:ToexplorethefeasibilityofapplyingN—succinimidyl一3一(2一pyridyldithio)propionate(SPDP) conjugationtechnologytothepreparationofanewdrugdeliverysystem:CCPs—Antibody—Nanospheresconjugates.Meth- otis:CCPs—Antibody—NanosphoresconjugateswerepreparedbytWOdifferentmethodsofSPDPcross—linking.CCPs—An- tibody～NanospheresconjugatesweretestedbySDS—PAGEassayandimmunofluorescentassay.Results:CCPs—Antibody— Nanospheresconjugatespreparedbytwodifferentmethods.whichwerereducedwithDTTallshowedthreeproteinbandsat lowmolecularweishtend.Therewasbrightestreactioninimmunofluorescent,Conclusion:Thesedataimplicatedthatcon. junctionofcell—penetratingpeptides,antibodiesandnanospheresbytwodifferentmethodsofSPDPconjugationtechnology wassuccessfulandthiswouldprovideabasisforfurtherstudiesonthenewdrugdeliverysystem:CCPs—?Antibody——Nano— spheresconjugates. Keywords:Antibody;CPPs;BSA;Nanospheres;Conjugation;SPDP 穿膜肽(cell～penetratingpeptides,CPPs)是一种能够 促进多种物质通过细胞膜的小分子多肽,具有携带小分子 蛋白,药物分子,核酸,抗体,脂质体和微粒等多种物质进入 细胞的功能.蛋白微球是目前较成熟的一类微球,具有 载药量大,缓慢释放药物等特性.单克隆抗体能够实现 药物的特异性靶向杀伤作用J.因此我们设想建立穿膜 肽一抗体一白蛋白微球药物传送系统,以实现药物缓释,靶 向,促进药物内化进入肿瘤细胞,从而达到提高药物对肿瘤 细胞的杀伤效率,降低不良反应的目的.本研究初步探讨 了采用蛋白偶联技术制备穿膜肽一抗体一微球偶联物这一 新型药物传送系统的可行性,为其进一