腈水合酶蛋白质纯化的研究进展研究.pdfVIP

第33卷 第 1期 高 师 理 科 学 刊 V01．33 No．1 2013拉 1月 JournalofScienceofTeachers CortegeandUniversity Jna． 2013 文章编号：1007—9831(2013)01—0050—04 腈水合酶蛋白质纯化的研究进展 王世伟 ，王卿惠 ，王惟熠 ，翟莹 (1．齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；2．天津科技大学 生物工程学院，天津 300457) 摘要：从产腈水合酶纯化的意义，腈水合酶的纯化步骤、策略、纯化产量和倍数以及Rhodococcus ruberCGMCC3090腈水合酶纯化的应用价值等，综述了腈水合酶纯化方面的研究进展． 关键词：腈水合酶；纯化；酶学性质 中图分类号：Q814．1 文献标识码：A doi：10．3969j／．issn．1007-9831．2013．01．015 Researchprocessonproteinpurificationofnitrilehydratase WANGShi-wei，WANGQing-hui，WANGWei-yi，ZHAIYing~ (1．SchoolofLifeScienceandAgricultureandForestry，QiqiharUniversity，Qiqihar161006，China； 2．SchoolofBiotechnology，TianjinUniversityofScienceandTechnology，Tianjin300457，China) Abstract：IthasbeensurveyedtoprovideacomprehensivecoverageofthepurificationstudyofNHasesatpersent includingpurificationsignificanceofNHasefromdifferentmicrobes，mehtodsandstrategiesofNHasepurification， yieldandfoldofpurification，wellashteapplicationvaluesofpurificationofNHasefrom Rhodococcusruber CGMCC3090strain． Kaywords：NHase；purification；enzymologyproperties 1 研究微生物腈水合酶的意义 腈水合酶 (NHase，EC4．2．1．84)能通过水合反应将腈类物质转化成酰胺．这种生物催化剂符合绿色化 工需要，在生物转化和环境保护中具有重要的研究和应用价值”捌．目前，许多微生物腈水合酶已经纯化．研 究发现，纯化腈水合酶表现出不同的性质，如有不同底物特异性、不同最适温度和pH值I3j_为了研究腈水 合酶的性质，可以使用产腈水合酶的微生物细胞，也可以利用纯化的腈水合酶作为研究对象，但是微生物 细胞结构和成分将会对深入研究腈水合酶性质带来不确定的影响．因此，使用纯化的酶研究其酶学性质更 能准确地反应腈水合酶本身的性质．另一方面，研究腈水合酶的结构必须得到适合x射线衍射的腈水合酶 单晶体，而获得单晶体的必要条件之一就是能得到高度纯化的腈水合酶蛋白质．因此，腈水合酶的纯化在 研究腈水合酶的酶学性质和结构中具有重要的理论和实践意义． 2 腈水合酶纯化步骤和酶活性测定 2．1 纯化步骤 腈水合酶的纯化步骤比较复杂，一般包括多个步骤才能将其逐渐纯化．大体步骤为：(1)菌株斜面活 化 (镜检)； (2)菌株的平板划线 (得到单菌落)； (3)菌体的种子培养 (得到纯培养种子)； (4)菌体 收稿 日期：2012一l1—1O 基金项目：国家科技基础条件平台资助项 目(0205KDA20214—10) 作者简介：王世伟 (1965一)，男，山东肥城人，副教授，博士，从事蛋白质纯化和结晶的研究．E—mail：wsw888535@shou．con 第 1期 王世伟，等：腈水合酶蛋白质纯化的研究进展