CO2乙醇水等电沉淀体系在蚓激酶纯化中的应用研究.pdfVIP

L032 CO - 乙醇-水等电沉淀体系在蚓激酶纯化中的应用 2 齐祥明1,2 关怡新1 姚善泾1 * 1 2 ( 浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江 杭州 310027 ； 中国海洋大学生命科学与技术学部食品工程 系，山东 青岛 266003) 摘 要 以加压CO 为挥发性酸，乙醇为助沉淀剂，对蚓激酶粗品在加压CO - 乙醇-水体系中的 2 2 沉淀情况进行了研究，采用本方法可以将蚓激酶粗品中的杂蛋白沉淀出来，实现蚓激酶粗品的 分离提纯。实验结果表明，加压CO2 改变了溶液的pH ，主要起到酸化剂的作用，该沉淀过程是 一个以等电沉淀为主的过程。乙醇一方面起到助沉淀的作用，另一方面可以使杂蛋白在较高pH 处沉淀出来。酶浓度较高的溶液中酶的稳定性相对较高，沉淀现象亦较明显。实验所考察的操 作范围为乙醇浓度 0%、30% ；酶浓度 1%、2.5% 、5% ；CO2压力 0~8MPa 。在此范围内，蚓激 酶基本能保持稳定，相对酶活在 80% 以上。对蚓激酶进行分离提纯的最佳条件是酶浓度 5%、 乙醇浓度 30%，压力 8MPa 。这些结果对该方法的进一步完善及其在蛋白质等生物活性成分分 离纯化领域的应用具有借鉴作用。 关键词 等电沉淀 乙醇 加压CO2 蚓激酶 PURIFICATION OF LUMBROKINASE USING COMPRESSED CARBON DIOXIDE-ETHANOL AQUEOUS SYSTEM 1,2 1 1 QI Xiang-Ming , GUAN Yi-Xin and YAO Shan-Jing 1 （ Department of Chemical and Biochemical Engineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027; 2Department of Food Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003 ） Abstract The purification of crude lumbrokinase in compressed carbon dioxide-ethanol aqueous system was carried out using ethanol as precipitation assistant and CO2 as a volatile acid. As shown in experiments, impurities in crude lumbrokinase solution were precipitated using this technique, the purification of crude lumbrokinase in supernatant could be achieved. As compressed CO changed pH of the solution, the compressed CO mainly serves as acidifier in 2 2 the precipitation, and the precip