结缔组织生长因子在血管紧张素Ⅱ诱导的人近端肾小管上皮细胞肥大中的作用研究.pdfVIP

结缔组织生长因子在血管紧张素II诱导的 人近端肾小管上皮细胞肥大中的作用 课题组 (东南大学附属中大医院) 摘 要：目的 肾脏细胞肥大是肾脏病变重要的代偿机制，与肾脏局部肾素血管紧张素系统 tissue 激活有密切关系，本研究探讨结缔组织生长因子(connectivegrowthfactor，CTGF)在 介导血管紧张素II(angiotensinII，AnglI)诱导的人肾近端小管细胞肥大中的作用。方法用 管上皮细胞株(HK-2)细胞内蛋白从头合成及细胞内蛋白质含量的影响；用流式细胞分析技术观 诱导细胞形态变化的影响。 掺入量的增加有抑制作用，并呈浓度和时间依赖性。AngII作用于细胞48h后，细胞平均直径、GO-Gl 导了AngII诱导的肾小管上皮细胞肥大效应。 关键词：人近端肾小管上皮细胞；血管紧张素II；结缔组织生长因子；细胞肥大 肾脏肥大是糖尿病肾病早期重要的病理生理学特征，与糖尿病肾病发展和肾脏硬化有密切的 关系。由于肾小管体积约占整个肾脏体积的90％，因而小管上皮细胞(tubularepithelialcell， TEC)肥大在肾脏肥大中占有十分重要的地位。近年研究表明，肾脏局部肾素血管紧张素系统(renin angiotensinsystem，RAS)的激活在肾脏纤维化发生发展中起着非常关键的作用啦!，血管紧张素 II(angiotensinII，AnglI)可以促进肾脏固有细胞肥大，并导致细胞外基质成分的积聚口1。但 其确切机制并不清楚。我们最近的研究提示，AnglI可以直接促进体外培养的人近端肾小管上皮细 tissue 胞产生结缔组织生长因子(connectivegrowth 和糖尿病大鼠模型早期肾小球肥大相关，使用AnglI受体拮抗剂伊贝沙坦可以明显抑制肾小球肥 大的发生和CTGF的表达H’，但是CTGF是否介导了AnglI诱导的细胞肥大，国内外尚未见文献报道。 本文初步探讨了CTGF在AnglI诱导肾小管细胞肥大中的可能作用。 254 一、材料和方法 (一)材料 II(美国Sigma公 基(美国GIBCO公司)，含10％胎牛血清(中国杭州四季青生物技术公司)：Ang 107Bq／ml，中国科学研 司)：山羊抗人多克隆抗CTGF抗体(美国RD公司)[3H卜Leucine(3．7X 国Sigma公司)；二甲苯，中国南京化学试剂厂)：考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒(中国南京建成生 Dickinson 物工程公司)；24孔培养板(丹麦NUNCOL公司)；FACSCalibur流式细胞仪(美国Becton 公司)。 ． (二)方法 Modified 1、细胞培养；HI(一2细胞株在含有10％胎牛血清的低糖型DMEM(Dulbeccos’SEagle’s Medium)培养液中培养，培养瓶置于5％C02、37。C的培养箱内，每2’3天传代一次。待细胞融合至 80％时，用0．25％的胰酶消化细胞，并吹打混匀，接种于24孔极中，接种密度为1X105个细胞／tL， 待细胞在24孔板中长至80％融合时，改用无血清DMEI卮培养液静置24小时，佼细胞同步静I上=于Go 期，随后换以含不同干预因素的无血清DMEM培养液对细胞进行千预。 的培养液干预细胞48小时，对照组为Omol／L；用10。mol／LAngII和不同浓度抗CTGF抗体(0， 作用细胞不同时间(0，24，48，72h)，0小时设为对照组。在培养的最后12小时，每孔加入预温 的[3H]-Leucine(9．25X104Bq·well～·ml。)，继续培养12