B淋巴细胞刺激因子对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226生长调控的研究.pdfVIP

中文摘要 B淋巴细胞刺激因子对多发性骨髓瘤细胞株 I RPM 8226生长调控的研究 摘 要 目的： 多发性骨髓瘤(Multiple 性浆细胞增生并伴有广泛溶骨病变为特征的B细胞系的恶 性肿瘤，大约占人体恶性肿瘤的1％．2％。近年来发病有逐 年增加的趋势。尽管新治疗手段如硼替佐米、沙利度胺及 其衍生物的应用乃至造血干细胞移植用于治疗MM，但其 仍难以治愈。因此探索可能的发病机制，从而寻找更多治 疗的靶点，具有非常重要的意义。近年来对MM发病机制 的研究中，细胞因子在MM的发生发展中的作用己广为重 视，做为本病的重要细胞因子_B淋巴细胞刺激因子(B Lymphocyte 中的作用，探索多发性骨髓瘤的发病机制，为多发性骨髓 瘤患者的临床靶向治疗提供理论基础和实验数据。 方法： 1．细胞培养和传代 人类多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226，培养于体积分数 箱中培养，每48—72小时传代一次，实验采用对数生长期细 胞，胎盘蓝染色拒染率均在95％以上。 中文摘要 2．1rHuBLyS对RPMl8226细胞的增殖实验 取对数生长期的RPMl8226细胞悬液，随机分成阴性 养液，不同浓度的BlyS组终浓度分别为0．1、O．5、1．0、 上清，每孔加入1 荡后于酶标仪570nm处测各孔吸光度值。 2．2 BlyS拮抗硼替佐米作用的实验 取对数生长期的RPMl8226细胞悬液，随机分成实验 组和对照组，对照组加入1001．tl细胞培养液，实验组第1组 加入1 00}tl 48小时后以上述同样的MTT法测量各孔的光吸收值。 影响 1．O％) AV分析软件测定细胞周期和细胞凋亡率。 后NF．w]3(p65)的蛋白表达情况 中文摘要 抗体，室温静置1个小时，再加入二抗，通过流式细胞仪 应用MuticycleAV分析NF—r．．B(p65)的蛋白表达情况。 5．western免疫印迹(westernblot)的方法检测不同浓 度BLys组别c-jun、P．p38的蛋白表达水平 别为0．599／ml、2．099／mlBLys培养48小时后分别提取细胞 actin作为内参照，应用westernblot方法检测不同组别c． iun、P．p38的蛋白表达水平。 结果： 一定浓度范围内呈时间剂量依赖关系。BLys浓度为0．1、 (72．79±10．54)％、(113．954-12．16)％、(136．824-11．8)％、 (162．25 25．5)％、(480．53 细胞增殖率分别为(407．72 (928．55±34．10)％、(1 RPMl8226的抑制作用。仅加入硼替佐米组、加入硼替佐米 +BLys组，共同培养48小时后细胞的吸光度值分别为 中文摘要 1．247±0．007。 5．55％、34．53±1．20％、46．3±3．18％。 达率由(X．Mode)26．6上升至43．2。 5．随着BLys浓度的加大，在一定范围内下调 蛋白的表达水平。 结论： 1．在一定浓度范围内，BLys促进人多发性骨髓瘤细胞 RPMl8226增殖，且呈时间、浓度依赖性。 RPMl8226的抑制作用。 关。 关键词：B淋巴细胞刺激因子；多发性骨髓瘤；增 殖；凋亡；westernblot； 4 英文摘要 onthe of Initial effect on study gr