高效毛细管电泳分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞的影响研究.pdf

第十一届全国离子色谱学术报告会论文集(浙江杭州.2006.11.28-30) 299 高效毛细管电泳分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞的影响 季宇彬，陈学军，汲晨锋 (哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨，150076 ) 摘要：目的 分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞电泳迁移能力的影响。方法 高效毛细管电泳法。结果 芦笋多 糖能减低荷瘤小鼠红细胞的电泳迁移时间，使之更接近正常红细胞，三个剂量组作用均非常显著(P<0.01) 。 结论 芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞有保护作用，这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。 关键词：芦笋多糖；红细胞；高效毛细管电泳 引言 芦笋(Asparagus officinalis Linn) ，学名石刁柏，又名龙须菜､文山竹､索罗罗，是百合科 天门冬属多年生草本植物。以往研究表明，芦笋含有皂苷､黄酮､多种氨基酸､多种维生素､ 硒､锌､铁及蛋自质､糖等多种营养成分，具有防治肿瘤的作用[1]，我们的前期研究结果表明， 芦笋多糖的抗肿瘤作用确切，本实验采用高效毛细管电泳法初步研究了芦笋多糖对荷瘤小鼠 红细胞功能的影响，揭示其抗肿瘤作用的机制。 1 实验部分 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物及瘤株 昆明种小鼠，体重20 ± 2.0 g ，雄性，哈尔滨医科大学动物实验中心 提供；S180 （肉瘤）购自黑龙江省肿瘤医院。 1.1.2 主要试剂 芦笋多糖（哈尔滨商业大学药物研究所），5-氟尿嘧啶(上海旭东海普药业 有限公司，批号： ，台盼兰，NaOH ，HCl ，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，试剂均 为分析纯，溶液均用重蒸水配制，使用前经 0.22 μm 的滤膜过滤。 1.1.3 主要仪器 P/ACE System MDQ 毛细管电泳仪（美国 Beckman 公司），离心机（北京 医用离心机厂）。 1.2 实验方法 1.2.1 小鼠肿瘤模型的建立 将接种后 7 d生长良好的的S180小鼠，颈椎脱臼处死，置 75%酒精浸泡 5 min，腹部皮肤 消毒后，用无菌注射器抽取乳白色的浓稠腹水(3~5 mL)，放入无菌容器内，置冰块中保存。 另取少量腹水，置于加有肝素的试管中，作为观察细胞形态及细胞计数用，癌细胞数为 97% 以上方可使用，腹水用无菌生理盐水 1:4 稀释，使肿瘤细胞数为 5×106/mL 。取配制好的细 胞悬液无菌操作小鼠左前腋皮下注射接种，每鼠接种 0.2 mL，制成实体瘤模型，整个操作 [2] 应在 30 min 内完毕 。 1.2.2 实验分组、给药剂量及途径 小鼠随机分为 6 组，每组 10 只。多糖实验组：芦笋多糖低、中、高剂量组（25 、50、 100 mg/kg）；阳性对照组：5-氟尿嘧啶 25 mg/kg ；阴性对照组：生理盐水；正常对照组：生 理盐水。 于接种后 24 h 开始 ip 给药，每只小鼠 0.2 mL/次，每日 1 次，连续 7 d，停药后24 h 眼 球采血。 1.2.3 红细胞样品制备 新鲜血液加三倍体积生理盐水，3000 r/min 离心 5 min，清洗 3 次。准确吸取红细胞沉 淀 100 μL用 0.1 mol/L，pH 7.4 的磷酸盐缓冲液 3 mL稀释，血球计数板计数(7×105个/mL) 。 1.2.4 电泳条件的确定 1.2.4.1 电压的选择 第十一届全国离子色谱学术报告会论文集(浙江杭州.2006.11.28-30) 300 先后采用 10、15、20 、25kV 等不同电压条件，结果在 20 kV 电压下电泳电流稳定，图 谱清晰，分离效果好｡ 1.2.4.2 磷酸盐缓冲液浓度及 pH 值的选定 选用磷酸盐缓冲溶液，分别配制 0.05mol/L，pH 7.0､pH 7.2､pH 7.4､pH 7.6 ；0.1 mol/L， pH 7.0､pH 7.2､pH 7.4､pH 7.6 ；0.2 mol/L，pH7.0､pH 7.2､pH7.4､pH 7.6 的磷酸盐缓冲液，通 [3,4] 过比较发现，0.1 mol/L，pH 7.4 的缓冲液分离最