高等植物光系统II捕光天线结构与功能的研讨.pdfVIP

摘 要 高等植物光系统II的捕光天线蛋白(LHC11)在光能的吸收、传递和调节激 发能在两个光系统之间的分配以及维持类囊体膜的垛叠等方面都起着重要的作 用，因而得到了广泛的研究。目前普遍认为LHCII在植物体内是以三聚体的形 式存在并行使功能的，但也有研究者发现了单体和寡聚体等多种形式的LHC11. 本论文以菠菜为研究对象，采用改进的方法从类囊体膜中提取纯化了LHCII三 聚体，对膜脂和色素在三聚体形成和蛋白空间结构中的影响，以及不同聚集态 LHC11组成、结构和功能的差异进行了较系统的研究。此外，还将Lhcb2基因 反向插入到烟草中，利用转基因植物来研究其生理功能.获得了如下结果: I，采用改进的方法从菠菜类囊体膜中分离纯化了LHCII。与改进前比，其 流程可以缩短2小时且产率也有明显的提高。SDS变性电泳和TritonX-100非变 性电泳的检测结果表明，此样品纯度较高，是由三条分子量分别为29KD,28KD 和26KD的多肤组成的异质三聚体。同时样品的吸收光谱和荧光光谱分析结果也 与前人的报道一致。 2，分析了LHCII三聚体中的膜脂和脂肪酸组成及含量。与PSII相比，LHC II含有相同的四种膜脂:MGDG,DGDG,PG和SQDG。但LHCII中PG的含 量是PSII的两倍，说明PSII中的PG主要富集在外周天线区域。同时PG中含 有特异的反式十六碳一烯酸，且含量很高。用专一消化PG上Sn-2位脂肪酸链的 磷脂酶灰 (PLA2)处理LHCII三聚体，然后再加入PG重组的方法证明了含十 六碳一烯酸的PG在三聚体结构的维持中起着至关重要的作用。去掉PG后，LHC II三聚体的结构受到了影响，部分解聚成了单体，同时其光谱特性也发生了变化， 表现为叶绿素b分子的吸收峰及其激发的荧光发射峰都明显下降。回加PG则可 使解聚的单体又重新聚集成三聚体。 3，分别用电洗脱和蔗糖密度梯度离心两种方法分离了LHCII三聚体、二聚 体和单体。两者比较，电洗脱对样品的破坏较大，而蔗糖密度梯度离心更加温和， 对蛋白上结合的色素影响不大。系统研究了不同聚集态LHCII的组成和光谱特 性后发现，三种聚集态的LHCII有相同的多肤组成，并且都结合着5种色素， 但是色素的含量差异较大。二聚体和单体中，叶绿素b和类胡萝 卜素分子的含量 比三聚体的低很多，此外，单体叶绿素a分子的含量也明显减少。对三种聚集态 LHCII的各种光谱特性进行分析的结果表明，由于叶绿素b和类胡萝 卜素分子 含量较少，二聚体和单体中叶绿素b和类胡萝 卜素的吸收均有所下降，而且从类 胡萝 卜素到叶绿素b以及从叶绿素b到叶绿素a的能量传递效率都低于LHCII 三聚体，总体表现为三聚体 二聚体单体。此外，不同单体之间叶绿素 a 到叶绿素a的能量传递也被破坏。推测三种聚集态LHCII在吸能、传能和结构 上的差异，可能是植物适应不同外界环境的一种调控机制。 4，模拟体内过程，在体外将大肠杆菌中表达的Lhcb2蛋白和色素进行重组， 以此来研究色素与蛋白组装过程中蛋白二级结构和色素结合状态的变化。结果表 明色素在脱辅基蛋白的体外重折叠中至关重要。在与色素重组的过程中，蛋白二 级结构中a-螺旋含量逐渐上升并最终接近天然水平，而无规卷曲逐渐减少。从光 谱的变化可以看出，色素分子与蛋白的结合经历了一个由无序到有序的过程，色 素蛋白复合物的光谱信号由弱变强，重组得到的样品与天然LHCII十分相似。 5，为了更好地研究LHCII异质三聚体中单体可能具有的独特生理功能，建 立了Lhcb2基因的反义抑制植物表达载体pBI-antiLhcb2，用根癌农杆菌介导法 转化烟草，获得了转基因植株。酶切和PCR鉴定证明，Lhcb2基因已经成功地 ’ 插入到烟草里.进一步的分子鉴定和生理生化功能分析还在进行中。 关键词:LHC11聚集态 膜脂 色素 结构 功能 ABSTRACT Light-harvestingchlorop勿11alb-proteincomplexofPSII(LHCII)inhigher plantplaysanimportantroleinlightharvest,energytransfer, ofthe excitationenergydistributionbetweentwophotosystemsandgranastacking.Ithas beenwidel